INMLCF - Comunicações Científicas e Pósteres
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Recent Submissions
- Munchausen by Proxy with Haloperidol: A case reportPublication . Fonseca, Suzana; Dias, MárioIntroduction: An 8-year-old male child with extrapyramidal symptoms was admitted at 3 pm at the Urgency of Pediatric Hospital. Extrapyramidal syndrome (EPS), sometimes referred to as neuroleptic malignant syndrome, is a neurological side effect of antipsychotic medication characterized by a set of symptoms, that include: hyperpyrexia (an early sign of this syndrome), generalized muscle rigidity, tremors, hypersalivation, altered mental status (including catatonic signs), and evidence of autonomic dysfunction (irregular pulse or blood pressure. This child had previous Hospital admissions with similar symptoms and the possibility of a Munchausen by Proxy Syndrome (MBPS) was considered for evaluation. This syndrome is a form of child abuse in which the carer (usually the mother) simulates, manipulates or produces symptoms of illness in the victim. In most cases the detrimental effect is caused by applying foreign substances, sometimes difficult to detect in the clinical laboratories. Serum and urine samples were collected and a toxicological screening in urine was performed at the hospital by immunoassay revealing positive results for barbiturates and amphetamines. A second urine sample, collected 2 hours later, tested negative to all groups screened. The analytical results didn´t matched with clinical disturbances of the patient and further diagnosis procedures yielded no pathological findings. The serum and urine samples were sent to the Department of Chemistry and Forensic Toxicology of National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences (INMLCF) for an extensive screening for drugs and medicines.
- Sudden death, motor vehicle accident, cerebellar tumourPublication . Simoes da Silva, Beatriz; Marques, C.; Coelho, S.; Ribeiro, O.; Vieira, Duarte NunoINTRODUCTION Portuguese forensic law determines that all the mortal victims of traffic accidents must be subjected to a forensic autopsy. In this particular case, a traffic accident with minor injury lead to unbalance a previous tumoral pathology with an unusual location (...)
- Intraventricular brain tumor: report of three casesPublication . Costa, Margarida; Henriques de Gouveia, Rosa; Simoes da Silva, BeatrizIntroduction: Colloid cysts are considered congenital non invasive benign lesions, enlarging very slowly. They account for less than 1% of symptomatic brain tumors, being the most common tumor of the 3rd ventricle (...)
- Estudo de microrganismos relacionados com infeções sexualmente transmissíveis, em contexto de crimes sexuais em Portugal - resultados preliminaresPublication . Catarina Almeida, Ana; Franco, Magda; Cainé, Laura; Amorim, AntónioOs crimes de agressão sexual são considerados como uma das agressões que merecem especial atenção dentro dos sistemas de justiça e são amplamente condenados pelas sociedades em todo o mundo. Além do impacto associado a relações sexuais não consentidas, a agressão sexual pode ter outras consequências para as vítimas, destacando-se o contacto com agentes responsáveis por infeções sexualmente transmissíveis (ISTs). As vítimas de crimes sexuais constituem uma população importante para a investigação de ISTs, dada a exposição a contactos sexuais forçados e maioritariamente desprotegidos. A subnotificação de casos, diferenças de incidência entre as populações e lacunas no processo de deteção, levam a que existam poucos estudos sobre a prevalência de IST em vítimas de crimes sexuais. No entanto, um estudo conduzido por Sachs et al. (2022) refere que a tricomoníase (12%), a gonorreia (4%) e a clamidiose (2%) são as infeções mais prevalentes entre estas vítimas. O Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, recentemente, passou a disponibilizar a possibilidade de deteção laboratorial de microrganismos envolvidos nas ISTs mais comuns. Deste modo, o principal objetivo deste trabalho é o estudo dos microrganismos associados a ISTs em vítimas de crimes sexuais em Portugal, através de zaragatoas colhidas das vítimas de casos de agressão sexual para identificação do agressor. Este estudo reflete uma inovação e otimização na aplicação destas metodologias, dado que permitem o uso de uma amostra para identificar o agressor e em simultâneo detetar a presença de microrganismos relacionados com ISTs. Os resultados preliminares deste estudo, desde logo, já permitiram concluir que é possível detetar Trichomonas vaginalis e Chlamydia trachomatis em zaragatoas com amostra colhida e armazenada por um período superior a 2 anos. Neste alinhamento, estes microrganismos associados a tricomoníase e clamidiose já foram detetados em vítimas de crimes sexuais em estudos anteriores.
- Differentiation of selegiline metabolites and illicit methamphetamine and amphetamine use in elderly postmortem cases: Insights from LC-MS/MS and immunoassay techniquesPublication . Costa, Suzel; Rosendo, Luana M.; Barroso, Mário; Franco, João MiguelAbstract: Introduction: In forensic toxicology, distinguishing between pharmaceutical metabolites and illicit substances is crucial for accurate case interpretation. This study explores two post-mortem cases involving elderly individuals where methamphetamine and amphetamine were detected, raising initial concerns about illicit drug use. Aims: To demonstrate the application of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and immunoassay techniques in differentiating between selegiline metabolites and illicit methamphetamine and amphetamine. Methods: Blood samples from three deceased elderly individuals (ages 91 and 89) were analyzed using LC-MS/MS for the quantitative detection of selegiline and metabolites. Initial screening revealed methamphetamine and amphetamine levels suggestive of potential illicit use. Immunoassay testing for dextro isomers (those associated with drug abuse) was subsequently performed to differentiate between isomers. Results and Discussion: LC-MS/MS analysis confirmed selegiline in both cases, with methamphetamine and amphetamine detected. Immunoassay results were negative for dextro isomers, indicating that the detected substances were L-isomers, which is consistent with selegiline metabolism rather than illicit use. Conclusion: This study highlights the critical role of combining LC-MS/MS and immunoassay techniques in forensic toxicology. The negative immunoassay results for dextro isomers clarified that the methamphetamine and amphetamine present were metabolic byproducts of selegiline therapy. Accurate differentiation between therapeutic and illicit substances is essential to avoid misinterpretation, particularly in elderly individuals, where illicit drug use is infrequent. These findings emphasize the need for comprehensive analytical approaches in forensic investigations to ensure accurate and reliable results.
- High concentrations of nordiazepam may impair the detection of benzoylecgonine by GC-MS with derivatizationPublication . Costa, Suzel; Rosendo, Luana M.; Barroso, Mário; Gallardo, EugeniaIntroduction: Forensic toxicology plays a pivotal role in legal investigations, particularly in detecting substances in biological samples. However, the simultaneous presence of multiple substances can pose analytical challenges. For instance, nordiazepam, a major metabolite of some benzodiazepines, can interfere with the detection of benzoylecgonine, a primary metabolite of cocaine, when using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) with N- methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide (MSTFA) derivatization. This interference could result in false negatives for benzoylecgonine detection. Aims: This study aims to assess whether N-methyl-N-(tert-butyldimethylsilyl)-trifluoroacetamide (MBDSTFA) derivatization can reduce interference from nordiazepam, thereby improving the detection and quantification of benzoylecgonine in biological samples. Methods: Solid phase extraction (SPE) was carried out on post-mortem blood samples using Oasis® MCX columns. Microwave derivatization with MSTFA or MBDSTFA followed after the extracts were evaporated. Results and discussion: Two derivatization reagents, MSTFA and MBDSTFA, were compared using GC-MS to evaluate their effectiveness. For this assessment, both the limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) for benzoylecgonine in this chromatographic method were 10 and 25 ng/mL, respectively. MBDSTFA derivatization significantly reduced analytical interference between nordiazepam and benzoylecgonine. In contrast, MSTFA derivatization resulted in substantial interference at high concentrations of nordiazepam, potentially leading to false negatives for cocaine detection. These findings highlight the superior performance of MBDSTFA in complex toxicological analyses. Conclusion: MBDSTFA derivatization is more effective than MSTFA for minimizing interference in the detection of benzoylecgonine in the presence of nordiazepam. This method enhances the specificity of forensic toxicological analyses and helps prevent false negatives for detecting cocaine consumption through its principal metabolite, thereby supporting more reliable legal and clinical decisions.
- Impacto da Derivatização Química na Deteção de Metabolitos de Cocaína na presença de BenzodiazepinasPublication . Costa, Suzel; Rosendo, Luana; Barroso, Mário; Gallardo, EugeniaA toxicologia forense desempenha um papel crucial em investigações legais, proporcionando informações essenciais sobre a presença e o impacto de várias substâncias em amostras biológicas. No entanto, esta área enfrenta desafios significativos devido a artefactos e interferências que podem dificultar a interpretação dos resultados. Este estudo aborda os desafios analíticos decorrentes da presença simultânea de cocaína e tranquilizantes benzodiazepínicos, especificamente o nordiazepam, em amostras biológicas. De facto, o nordiazepam, uma importante benzodiazepina, pode interferir na deteção e quantificação da benzoilecgonina, o principal metabolito da cocaína, quando se utiliza a cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS). Recorreu-se à extração de fase sólida (SPE) em amostras de sangue post-mortem, usando colunas Oasis® MCX. Após a evaporação dos extratos, procedeu-se à derivatização por micro-ondas com MSTFA (N-metil-N-(trimetilsilil)trifluoroacetamida) ou MBDSTFA (N-metil-N-(terc-butildimetilsilil)-trifluoroacetamida). A análise foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a um detetor de massa. Os resultados demonstraram que com a derivatização por MSTFA a presença de nordiazepam causava interferências significativas na deteção de benzoilecgonina, dificultando a confirmação qualitativa deste último composto. Este fenómeno foi evidenciado em cromatogramas onde picos cromatográficos correspondentes a fragmentos iónicos da benzoilecgonina foram observados mesmo quando apenas o nordiazepam foi injetado. Por outro lado, ao utilizar MBDSTFA como reagente derivatizante, não houve interferência significativa entre nordiazepam e benzoilecgonina às concentrações de 10 ng/mL e 25 ng/mL (limite de deteção e quantificação, respetivamente, da benzoilecgonina), ao contrário do observado com a derivatização por MSTFA. Este estudo destaca a necessidade de procedimentos de derivatização adequados de modo a diminuir o número de falsos negativos nos ensaios toxicológicos e enfatiza a importância de metodologias confiáveis em investigações forenses. A implementação de processos de validação rigorosos e o uso de agentes de derivatização alternativos, quando necessário, são cruciais para evitar interferências que prejudiquem a correta identificação dos tóxicos. As conclusões apresentadas contribuem para uma melhor compreensão das limitações da toxicologia forense, oferecendo recomendações práticas para aumentar a robustez das análises toxicológicas em casos envolvendo a cocaína.
- Evolução analítica no Serviço de Química e Toxicologia Forenses. Os últimos 20 anosPublication . Simões, Susana; Castañera, Antonio; Franco, João MiguelA capacidade de um laboratório forense para responder adequadamente às solicitações analíticas que lhe são dirigidas depende não apenas da qualificação dos seus recursos humanos, mas, também, em larga medida, da tecnologia disponível. É por isso da maior importância que os laboratórios disponham de equipamentos analíticos adequados aos desafios e solicitações atuais, o que inclui a deteção de fármacos recentes, presentes nas amostras biológicas em concentrações cada vez menores, ou a deteção de novas substâncias psicoativas. Estes requisitos surgem intimamente ligados à necessidade de a resposta analítica ser alcançada em prazos curtos, mesmo quando o laboratório está confrontado com um elevado número de amostras, com benefício para a Justiça e para os cidadãos que aguardam tais resultados. Nos últimos 20 anos, e em particular durante a última década, o Serviço de Química e Toxicologia Forenses procurou adaptar-se a esta realidade, promovendo uma transição tecnológica que tem vindo a evidenciar ser capaz de responder aos atuais desafios. Esta transição, com particular ênfase na utilização de métodos hifenados que utilizam a cromatografia líquida e a espectrometria de massa, permitiu a introdução de melhorias significativas. Merecem um particular destaque aspetos como a utilização de métodos analíticos capazes de efetuar a deteção simultânea de um elevado número de substâncias com interesse toxicológico e, não menos importante, utilizando menores quantidades de amostra. Esta nova realidade, associada a uma simplificação do processamento das amostras biológicas, tem permitido alcançar notáveis progressos não apenas no número e tipo de substâncias pesquisadas, mas também pela redução de custos e menor impacto negativo para o ambiente. Contudo importa referir que em alguns casos, a maior complexidade de utilização dos equipamentos e o facto de se efetuar a pesquisa simultânea de muitos fármacos, drogas de abuso e outras substâncias com interesse toxicológico obriga, da parte dos colaboradores, à dedicação de mais tempo ao tratamento dos dados analíticos recolhidos. O objetivo deste trabalho consiste em apresentar a evolução tecnológica do Serviço de Química e Toxicologia Forenses ao longo dos últimos 20 anos, com natural ênfase na forma como esta se refletiu na melhoria do seu desempenho, sem deixar, contudo, de identificar as limitações que ainda se mantêm e os desafios que representa.
- Do passado ao futuro: aplicações do ADN antigoPublication . Henriques, Madalena; Cainé, Laura; Amorim, AntónioIntrodução: Estudar as populações do passado é essencial para compreender a evolução humana e colmatar limitações a nível de saúde que impactam diretamente o presente. A presente comunicação visa apresentar uma visão geral sobre os estudos desenvolvidos com ADN antigo, realçando as suas limitações e vantagens, sob a forma de uma revisão narrativa. Material e Métodos: Para evidenciar a situação atual, fez-se uma análise bibliográfica dos estudos previamente desenvolvidos sobre o tema, abordando diferentes subtópicos, de forma a destacar as principais necessidades e perspetivas futuras. Resultados: A identidade genética de cada indivíduo concentra-se no seu ADN, e seu estudo fornece informações valiosas sobre processos evolutivos. As alterações observadas no ADN antigo, como mutações, rearranjos cromossómicos e variações no número de cópias de genes, são fundamentais para a reconstrução da história genética das populações. Contudo, a análise deste material é frequentemente desafiada por fatores externos, como fragmentação do ADN, quantidade limitada de amostra, presença de material genético exógeno, alterações epigenéticas e condições ambientais. Assim, as desvantagens da extração e interpretação são superadas pela compreensão aprimorada da nossa evolução, enquanto indivíduos e populações. No campo da saúde, o ADN antigo permite estudar doenças genéticas (fibrose quística, anemia falciforme, síndromes de Down, Turner, etc.), hereditárias (hemofilia A, acondroplasia, etc.), oncológicas (deteção de mutações em genes como BRCA1 e BRCA2, sinais de osteocarssomas, etc.), infeciosas e a origem de pandemias (tuberculose, hepatite(s), malária, HIV, etc.). Outras finalidades incluem análise de predisposição genética e epigenética, aprimoramento de técnicas de diagnóstico e terapêutica, estimativa de relações de parentesco, evolução humana e alterações nas dietas. A comparação de ADN antigo de diferentes regiões, por exemplo através de haplótipos, revela padrões de migração e ancestralidade biogeográfica de populações. Estudar a disseminação e impacto destas doenças em diferentes populações e períodos ajuda a esclarecer a sua origem e propagação. Os estudos com ADN antigo iniciam-se com a preparação e limpeza da amostra (cabelos, dentes, ossos, etc.) e com a recolha do máximo de informação possível previamente conhecida, seguida pela extração, purificação, fragmentação e organização do ADN em biblioteca de dados, amplificação por PCR e sequenciação. Este último passo pode ser feito por diversas técnicas, sendo a mais vantajosa a sequenciação de última geração (NGS) com marcadores STR e SNPs. É uma sequenciação em massa, permitindo uma rápida análise. O último passo é a análise bioinformática, que deve ser cruzada com dados sócio biográficos. Discussão e Conclusões: Em suma, os estudos com ADN antigo oferecem vantagens significativas para a ciência e medicina atuais, permitindo superar diversas limitações. Conhecendo mais sobre a evolução genética de doenças e a adaptação humana a patógenos, compreendemos melhor os mecanismos de resistência e suscetibilidade. Este avanço auxilia o desenvolvimento de terapias mais precisas e estratégias preventivas, aperfeiçoando abordagens diagnósticas e intervenções clínicas. Além do valor científico, o ADN antigo enriquece o conhecimento sobre a estrutura social e familiar dos antepassados. Assim, o ADN antigo aprofunda a nossa compreensão científica e conecta as pessoas à sua história e identidade cultural.
- ADN antigo: aplicações para além dos obstáculosPublication . Henriques, Madalena; Cainé, Laura; Amorim, AntónioA identidade genética de qualquer indivíduo está centrada no seu ADN e a sua análise pode, também, fornecer informações acerca da evolução humana. O ADN antigo e as suas alterações (mutações, rearranjos cromossómicos, variações no número de cópias de genes, etc) são fundamentais para o estudo das populações passadas. Contudo, a sua análise pode ser prejudicada pelos fatores externos, tal como a elevada fragmentação do ADN, quantidade limitada de amostra e presença de material genético exógeno. As desvantagens que a extração e interpretação do ADN antigo apresentam são superadas pela compreensão aprimorada da nossa evolução, enquanto indivíduos e populações. Deste modo, o ADN antigo apresenta diversas aplicações: estudo das doenças genéticas (fibrose quística, Síndrome de Down, Síndrome de Turner, progeria, anemia falciforme, Síndrome de Angelman, Síndrome de Prader-Willi, etc.), hereditárias (hemofilia A, acondroplasia, etc.), oncológicas (oncogenes, deteção de mutações em genes como BRCA1 e BRCA2 e sinais de osteossarcoma), infeciosas e origem de pandemias (peste negra, por Yersinia pestis, e tuberculose, por Mycobacterium tuberculosis). Outras finalidades são a estimativa de identificação e relações de parentesco, ancestralidade biogeográfica de populações humanas e, ainda, alterações das dietas, evolução e migrações das populações. O estudo do ADN antigo pode realizar-se por diferentes técnicas, sendo atualmente a mais vantajosa a sequenciação de última geração (NGS), com recurso aos marcadores STR (Short Tandem Repeats) e SNPs (Single-nucleotide Polymorphisms). Estes estudos iniciam-se com a preparação da amostra, nomeadamente recolha de informação acerca de cada resto esquelético humano e da limpeza de cada osso. A análise genética passa pela extração do ADN, a sua purificação, fragmentação e organização em biblioteca de dados, amplificação das cadeias por PCR e sequenciação de todo o material genético, nomeadamente por NGS. Esta sequenciação em massa permite uma rápida análise e pode ser realizada por diferentes modelos de sequenciadores. O último passo é a análise bioinformática, que deve ser cruzada com os dados socio biográficos. A comparação de ADN antigo de diferentes regiões, por exemplo com recurso aos haplótipos, pode revelar padrões de migração e ancestralidade biogeográfica de populações humanas. Por outro lado, estudar a disseminação e impacto destas doenças em diferentes populações e períodos ajuda a esclarecer a origem e propagação das mesmas. Em suma, o ADN antigo permite uma melhor compreensão dos patógenos e doenças atuais, de forma a aprofundar o conhecimento científico e desenvolver terapias mais eficazes. Para além da importância a nível de investigação, é essencial devolver aos familiares informações sobre os seus antepassados e potenciais estruturas familiares e sociais, por exemplo com base em sepulturas coletivas ou cemitérios, fornecendo uma visão mais precisa da sua história.