INMLCF - Comunicações Científicas e Pósteres
Permanent URI for this collection
Browse
Browsing INMLCF - Comunicações Científicas e Pósteres by Title
Now showing 1 - 10 of 238
Results Per Page
Sort Options
- 1,4-Butanediol intoxication: a case reportPublication . Castro, André Lobo; Tarelho, Sónia; Dias, Ana Sofia; Melo, Paula; Teixeira, Helena; Franco, João MiguelGamma-hidroxibutyric acid (GHB) is an endogenous compound with known action at the neural level. Its psychoactive effects led to an illicit use context including recreational purposes, muscle building effects in bodybuilders and drugs-facilitated crimes, specifically, in sexual assaults. Besides the use of the main compound, there are precursors, like Gammabutyrolactone (GBL) and 1,4-butanediol (1,4-BD), usually non controlled substances, allowing a much easier way to obtain the target-compound. The authors present the first reported intoxication case in Portugal with 1,4-Butanediol, including the quantification of GHB and GHB-GLUC in serum, by GC-MS/MS TQD. A male, 25 years old, entered in coma at the hospital emergency room, with the suspicion of an intoxication due to an unknown liquid ingestion. The forensic toxicology lab was asked to collaborate in order to identify the possible substance(s) involved and provide adequate treatment to the patient. The suspicious liquid and a serum sample were sent by the hospital and analysed by GC-MS-single quadrupole and GC-MS/MS TQD, respectively. A methodology including protein precipitation and GC-MS/MS TQD analysis was used to detect and quantify GHB and GHB-GLUC in serum. Toxicological analysis revealed the presence of 1,4-Butanediol in the liquid and GHB [171 mg/L] and GHB-GLUC [13,7 mg/L] in serum.The victim reverted the coma state with no neurological sequelae. This was the first detected case in Portugal with 1,4-Butanediol, suggesting that it is important to be aware that consumers have different options to acess illicit compounds, such as GHB. On the other hand, GHB-GLUC was identified and quantified for the first time in a real case sample, due to intoxication. This case highlights the importance of analyzing all samples for active compounds, percursors and metabolites that can lead to the main intoxication origin.
- 16 Y-Specific STR Analysis in Human Remains IdentificationPublication . Vieira-Silva, Cláudia; Cruz, C.; Ribeiro, Teresa; Lucas, Isabel; Geada, H.; Espinheira, R.Forensic investigation often requires the use of degraded biological material, especially for determining the identity of human remains. Y-STRs, offer new perspectives for identification and kinship analysis especially on forensic deficiency cases 1 in complement of autosomal STRs. The non-recombining portion of the Y-chromosome is of value providing additional data in paternal lineage identification. The aim was the study of 16 Y-STR loci to perform human remains identification - the minimal Y-STR haplotype - DYS19, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS19, DYS389I/II, DYS385 – and – GATA A .1(DYS460), GATA A 7.2 (DYS461), GATA C4, GATA H4, DYS437, DYS438, DYS439 loci, that are part of the Y-chromosome quality control Group of the Spanish and Portuguese Group (GEPY) of the ISFG. Y-STR typing in degraded biological material has major technical challenges since each sample has unique characteristics. The best results were obtained in autopsy bloodstains may be due to the fact that the autolysis mechanisms are still incipient. Otherwise blood kept at 4º C for more than a year didn’t provide the same good results. Liquid blood samples from deceased individuals may contain porfirinic compounds from hemoglobin, powerful PCR inhibitors difficult to eliminate9. In bone and teeth samples the source of inhibitors may be a high amount of DNA from other micro-organisms such as bacteria and fungi which invade bone9 and probably this kind of contaminants can explain some of the results obtained in bones and teeth samples submitted to prolonged humidity, temperature environmental conditions and also adverse soil characteristics. The problem with the studied samples seems not to be DNA quantity but the out-of-control presence of inhibitors that interfere not only with the extraction but also with the amplification process because most of the results were obtained with a dilution of DNA extraction and adding more Taq, sometimes 2 or 3 fold. With these samples, it seems that the success or failure depends on each sample itself and it should be treated individually. The number of distinct factors connected to each sample is difficult to calculate, so it is necessary to make a few attempts in order to have as many results as possible.
- 5 Anos das agressões sexuais: análise da prevalência e fatores do riscoPublication . Smyk, B.; Ramalho, M.; Mendonça, Ricardo; Teixeira, Helena M.; Carreira, Carla
- Administração Terapêutica de Canabidiol – Eficácia, Segurança, Qualidade? – Estudo de um casoPublication . Castro, André Lobo; Tarelho, Sónia; Campos, Maria Graça; Franco, João MiguelIntrodução: A utilização recreativa de canabinóides é sobejamente conhecida, inserindo-se num contexto clássico do consumo ilícito de substâncias. No entanto, nos últimos anos, a utilização de alguns compostos deste grupo para fins terapêuticos passou a estar abrangida pela Lei 33/2018, de 18/07, que estabeleceu o quadro legal para a utilização de medicamentos, preparações e substâncias à base da planta da canábis para fins medicinais. Mais tarde, em 2019, o DL 8/2019, de 15/01, procedeu à sua regulamentação. Apesar do quadro legal referido, a sua utilidade e eficácia são ainda objeto de controvérsia e discussão. Paralelamente a este enquadramento legal, encontra-se disponível em algumas lojas “óleo de cannabis”, contendo, em teoria, baixos níveis de THC, abrindo a possibilidade de consumo com fins terapêuticos, em automedicação, devido à presença de Canabidiol (CBD) na sua formulação. Neste trabalho, os autores abordam a relevância da determinação de CBD num caso de estudo envolvendo uma criança com Encefalopatia Epilética provocada por FIRES (Febrile Infection Refractory Epilepsy Sindrome) diagnosticada aos dez meses. A doente sofria inúmeras crises epiléticas por mês, associadas ao sono, sendo que o tratamento das epilepsias é, numa primeira linha de tratamento, realizado com medicamentos antiepiléticos. Paralelamente à terapêutica convencional, foi também administrado óleo de CBD. Inicialmente, o produto em causa refere que contem 3,3 mg de CBD e menos de 0,2 mg de THC/gota (toma de 4 gotas cerca de 3h antes da colheita). Meses mais tarde um segundo produto veio substituir o anterior, com 1000 mg de CBD por 10 mL e <0,2% THC (toma de 4 gotas cerca de 14h antes da colheita). Material e Métodos: O SQTF-N recebeu amostras de sangue e urina da paciente, colhidas em momentos distintos, bem como do óleo de CBD administrado, tendo por objetivo detetar a presença e quantificar canabinóides, nomeadamente, THC, 11-OH-THC, THCCOOH e CBD, por CG-MS/MS. Resultados e Discussão: No caso dos canabinoides, verificou-se a ausência de THC e de 11-OH-THC, quer no sangue, quer na urina. A amostra de sangue da 1ª colheita apresentou um valor de 15 ng/mL de CBD. A amostra de sangue da 2ª colheita apresentou valores de 10 ng/mL de CBD e de 2 ng/mL de THCCOOH. As amostras de urina resultaram negativas (LOD: 1 ng/mL). Paralelamente, a análise do antiepilético, efetuada noutro laboratório, apresentou uma dose sub-terapêutica, com prescrição de aumento da mesma nos meses subsequentes. Uma preocupação premente reside no facto de que, até à data, os três pilares de qualquer fármaco (Eficácia, Segurança e Qualidade) ainda não tem validação para os extractos de Cannabis, estejam eles sob a forma de óleos (isentos ou não de THC) ou em qualquer outra formulação que não seja medicamento, pelo que há sempre risco potencial, em especial em bebés. Paralelamente, a difusão de informação, nem sempre de origem fidedigna e cientificamente controlada, relativamente ao CBD, não contribui para uma clarificação inequívoca da eficácia do composto em contexto medicinal. Conclusões: A administração de CBD ou, em alternativa, de misturas de THC/CBD, com rácios variados, tem sido alvo de avaliação, quer em termos de eficácia terapêutica, quer em termos de surgimento de efeitos adversos. No caso em análise, os resultados obtidos sugerem a ausência de produção de THC a partir da administração de CBD. Paralelamente, o surgimento do THCCOOH na amostra com maior intervalo de tempo entre a administração e a colheita é coerente com estudos publicados por outros autores. A perceção e a compreensão de todo o mecanismo metabólico do CBD, associada a toda a ação e eficácia terapêuticas serão fulcrais para se entender a eventual valia do composto no contexto de administração terapêutica. Nesse sentido, a disponibilidade de uma metodologia analítica que permita a identificação e a quantificação inequívocas dos compostos canabinóides referidos, existente no SQTF-N, afigura-se, indubitavelmente, como uma ferramenta de utilidade inegável neste contexto.
- ADN antigo: aplicações para além dos obstáculosPublication . Henriques, Madalena; Cainé, Laura; Amorim, AntónioA identidade genética de qualquer indivíduo está centrada no seu ADN e a sua análise pode, também, fornecer informações acerca da evolução humana. O ADN antigo e as suas alterações (mutações, rearranjos cromossómicos, variações no número de cópias de genes, etc) são fundamentais para o estudo das populações passadas. Contudo, a sua análise pode ser prejudicada pelos fatores externos, tal como a elevada fragmentação do ADN, quantidade limitada de amostra e presença de material genético exógeno. As desvantagens que a extração e interpretação do ADN antigo apresentam são superadas pela compreensão aprimorada da nossa evolução, enquanto indivíduos e populações. Deste modo, o ADN antigo apresenta diversas aplicações: estudo das doenças genéticas (fibrose quística, Síndrome de Down, Síndrome de Turner, progeria, anemia falciforme, Síndrome de Angelman, Síndrome de Prader-Willi, etc.), hereditárias (hemofilia A, acondroplasia, etc.), oncológicas (oncogenes, deteção de mutações em genes como BRCA1 e BRCA2 e sinais de osteossarcoma), infeciosas e origem de pandemias (peste negra, por Yersinia pestis, e tuberculose, por Mycobacterium tuberculosis). Outras finalidades são a estimativa de identificação e relações de parentesco, ancestralidade biogeográfica de populações humanas e, ainda, alterações das dietas, evolução e migrações das populações. O estudo do ADN antigo pode realizar-se por diferentes técnicas, sendo atualmente a mais vantajosa a sequenciação de última geração (NGS), com recurso aos marcadores STR (Short Tandem Repeats) e SNPs (Single-nucleotide Polymorphisms). Estes estudos iniciam-se com a preparação da amostra, nomeadamente recolha de informação acerca de cada resto esquelético humano e da limpeza de cada osso. A análise genética passa pela extração do ADN, a sua purificação, fragmentação e organização em biblioteca de dados, amplificação das cadeias por PCR e sequenciação de todo o material genético, nomeadamente por NGS. Esta sequenciação em massa permite uma rápida análise e pode ser realizada por diferentes modelos de sequenciadores. O último passo é a análise bioinformática, que deve ser cruzada com os dados socio biográficos. A comparação de ADN antigo de diferentes regiões, por exemplo com recurso aos haplótipos, pode revelar padrões de migração e ancestralidade biogeográfica de populações humanas. Por outro lado, estudar a disseminação e impacto destas doenças em diferentes populações e períodos ajuda a esclarecer a origem e propagação das mesmas. Em suma, o ADN antigo permite uma melhor compreensão dos patógenos e doenças atuais, de forma a aprofundar o conhecimento científico e desenvolver terapias mais eficazes. Para além da importância a nível de investigação, é essencial devolver aos familiares informações sobre os seus antepassados e potenciais estruturas familiares e sociais, por exemplo com base em sepulturas coletivas ou cemitérios, fornecendo uma visão mais precisa da sua história.
- ADN antigo: perspetivas e desafiosPublication . Correia Dias, Helena; Franco, Magda; Balsa, Filipa; Serra, Armando; Afonso Costa, Heloísa; Nascimento, Rui; Corte Real, Francisco; Cainé, Laura; Amorim, AntónioO DNA antigo (aDNA) pode ser uma fonte crucial de informação para estudos sobre a evolução e história das populações, revelando aspetos importantes, como migrações e interações humanas. Desde o primeiro estudo baseado no isolamento de aDNA, em 1984, novos desafios e oportunidades surgiram na área. Ao longo dos anos, com as melhorias técnicas nos métodos de extração de ADN e a emergência de novas metodologias de sequenciação de alto rendimento, como massive parallel sequencing, foram também impulsionadas novas perspetivas neste campo. Os restos humanos antigos, provenientes de escavações arqueológicas e de coleções museológicas, podem ser difíceis de analisar, principalmente devido à contaminação por ADN moderno, à degradação e exiguidade do aDNA, à contaminação laboratorial, ao armazenamento incorreto, às condições ambientais, entre outros. Além disso, apesar de muitos métodos de pré-tratamento terem sido propostos, poucos estudos relatam a preservação da estrutura e integridade do espécime. Os ossos e dentes são, muitas vezes, a única evidência da existência de um indivíduo ou população e devem ser analisados, mas essencialmente preservados. A análise de aDNA consiste, resumidamente, na preparação da amostra (usando, preferencialmente, um método não invasivo), extração de ADN, quantificação de ADN, PCR e sequenciação. O processo de preparação da amostra é determinante devido às características particulares do aDNA, como a baixa quantidade e a extensa degradação. Uma das questões mais importantes é a autenticidade do aDNA, sendo essencial minimizar o risco de contaminação por ADN moderno. Na extração de ADN, considerando amostras museológicas, é necessário selecionar um método não destrutivo, seguido de um método de quantificação preciso, que permita também otimizar a extração e detectar inibidores da PCR. A PCR deve também ter características específicas, comparando com a amplificação tradicional. Uma PCR dividida em dois passos é essencial para ultrapassar os artefactos do aDNA degradado. É aconselhável fazer múltiplas reações de PCR da mesma amostra e depois sequenciar as réplicas por sequenciação de Sanger. Após alinhamento e comparação das múltiplas sequências, a sequência de interesse é obtida. Recentemente, o Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Centro (SGBF-C) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses (INMLCF) criou um Laboratório de ADN Antigo com o objectivo principal de estudar amostras arqueológicas com diferentes intervalos post-mortem. Considerando que a análise de aDNA desempenha um papel crucial nos estudos arqueológicos e paleogenómicos, o objectivo da presente comunicação é divulgar e partilhar na comunidade científica o nosso novo Laboratório de ADN Antigo do INMLCF e mostrar o seu potencial para a expansão da investigação em aDNA, sendo que este laboratório está integrado num projecto científico que estuda comunidades da pré-história recente, na região centro de Portugal (MEDICE II).
- ADN mitocondrial: Estudo de validação interna de metodologia de sequenciaçãoPublication . Domingos, Margarida; Afonso Costa, Heloísa; Nascimento, Rui; Feiteiro, Mariana; Corte Real, Francisco; Amorim, AntónioEm genética forense, a sequenciação do ADN mitocondrial (ADNmt) pode ser uma ferramenta crucial designadamente sempre que não é possível obter ADN nuclear (ADNn) analisável, a partir das amostras biológicas. Amostras recolhidas em cadáveres em avançado estado de decomposição e cabelos ou pêlos recolhidos em local de crime são exemplos de amostras biológicas a partir das quais a análise do ADNmt pode ser o único meio de prova genético. O ADNmt é vantajoso por existir em maior quantidade do que o ADNn, mas tem a desvantagem de ser um elemento não individualizante, sendo comum a todos os indivíduos da mesma linhagem materna. O Serviço de Genética e Biologia Forenses (SGBF) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF), está a implementar a sequenciação massiva em paralelo (MPS), sequenciação de segunda geração. A MPS, relativamente à técnica de sequenciação de Sanger (SS), tem como vantagens, desde logo, permitir sequenciar o genoma mitocondrial completo e oferecer a capacidade de analisar múltiplas amostras biológicas em simultâneo. Com o objetivo de implementar e validar a sequenciação do genoma mitocondrial por MPS foi avaliada a concordância entre as metodologias SS e MPS. Foram selecionadas 64 amostras biológicas, previamente estudadas e analisadas pela metodologia SS. Para o estudo pela metodologia MPS as amostras foram extraídas com PrepFiler Express BTA™ Forensic DNA Extraction Kit e quantificadas com Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit. A preparação de bibliotecas de ADNmt foi feita num equipamento Ion Chef™ com o Precision ID mtDNA Whole Genome Panel e o Precision ID DL8 Kit. Na quantificação das bibliotecas de ADNmt foi utilizado o Ion Library TaqMan™ Quantitation Kit. A preparação do template e carregamento do Ion 530™ Chip foi realizada no Ion Chef™ com os kits Ion S5™ Precision ID Chef & Sequencing Kit. A sequenciação, através da deteção de alterações de pH provocada pela libertação de iões de hidrogénio (H+), ocorridas durante a polimerização do ADN e incorporação de bases, foi realizada num Ion GeneStudio™ S5 System e em conjunto com o sistema Ion Torrent™ que determinou a sequência da molécula em estudo, transformando o sinal químico em sinal digital. A análise e determinação do haplótipo do ADNmt foi realizada com o Converge™ Software. O haplótipo de ADNmt determinado com as metodologias SS e MPS foi coincidente em todas as amostras. Adicionalmente, a metodologia MPS aumentou a eficiência e precisão na análise das amostras de ADNmt. A simplicidade do sistema MPS elimina a necessidade de utilização de nucleotídeos modificados, de lasers, scanners e câmaras de deteção, garantindo exatidão na deteção dos polimorfismos. Este sistema garante ainda uma cobertura homogénea da sequência em estudo, até mesmo em regiões ricas em conteúdo GC e regiões homopoliméricas.
- Age estimation based on DNA extracted from semen samplesPublication . Cainé, Laura; Silva, Benedita; Pedro, Ana; Fadoni, Jennifer
- Amostras biológicas alternativas em processos de Investigação de Parentesco- A propósito de um casoPublication . Vieira da Silva, Cláudia; Serrano, Filipa; Fernandes, Carla; Amorim, AntónioNo âmbito das investigações biológicas de parentesco, perícias forenses mais requisitadas no Serviço de Genética em Biologia Forenses, são, em geral, estudadas amostras de referência cujas metodologias são de fácil implementação e estão perfeitamente descritas e validadas. No entanto, por vezes surgem processos, que necessitam do estudo de amostras complexas que necessitam de metodologias mais complexas de forma a obter perfis genéticos que respeitam os critérios de qualidade existentes no SGBF-S. O desenvolvimento de metodologias em biologia molecular e a sua implementação laboratorial, tem contribuído para a obtenção de resultados robustos a partir de amostras desafiantes. No âmbito deste trabalho, refere-se um caso de investigação de parentesco, requisitado pelo ministério público que no âmbito de uma averiguação oficiosa de paternidade, solicitou ao SGBF-Sul, a realização dos respetivos exames genéticos ao Pretenso Pai, Mãe e Filha falecida, cujas amostras disponíveis eram blocos de parafina com tecidos biológicos inclusos, preservados na maternidade onde decorreu o óbito.
- Análise do trabalho desenvolvido durante o primeiro ano da Unidade de Base de Dados de Perfis de ADNPublication . Bogas, Vanessa; Cardoso, Paula; Bento, Ana; Real, F. Corte; Brito, PedroIntrodução : A 1 de janeiro de 2023 à Unidade de Base de Dados de Perfis de ADN (BDADN) iniciou funções assumindo, para além da gestão do software responsável pelo armazenamento de perfis genéticos, a inserção de perfis genéticos e respetivos dados, a análise e comunicação de coincidências e resposta a solicitações de dados pessoais e processuais, a administração de todas as restantes solicitações dirigidas ao Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses (INMLCF), a nível nacional, no âmbito da Base de Dados de ADN, como por exemplo, pedidos de colheita e inserção, até então sob a responsabilidade do Serviço de Genética e Biologia Forenses. A BDADN é certificada pela NP EN ISO 9001:2015, desde o início de 2022, pelo que, a toda a responsabilidade anteriormente descrita, acresce também a manutenção dos requisitos de qualidade exigidos por esta norma. Com este estudo pretende-se fazer uma caracterização geral do trabalho desenvolvido por esta Unidade, durante o primeiro ano de atividade, especialmente no que diz respeito a comunicações com entidades externas e internas ao INMLCF. Material e Métodos: Para a realização deste estudo, foi feito o levantamento dos processos criados no software de gestão documental EdocLink, entre 1 de janeiro e 31 de dezembro de 2023, particularizando as solicitações recebidas de autoridades judiciárias nacionais, provenientes de outras entidades no âmbito de cooperações internacional, precedentes dos laboratórios, e ainda todas as comunicações enviadas aos laboratórios e autoridades judiciárias, no período acima referido. Posteriormente, com recurso ao software Excel, os dados foram analisados permitindo fazer uma avaliação do trabalho desenvolvido da BDADN, afetos às tarefas anteriormente referidas, durante o ano de 2023. Resultados e Discussão Após a análise dos dados verifica-se que, durante o ano de 2023, foram criados 7578 processos em EdocLink no contexto dos quais foram recebidas 8762 solicitações das diversas entidades acima referidas, resultando em 9061 comunicações efetuadas. Com o intuito de avaliar o volume de trabalho no contexto referido, foi calculado um valor médio mensal, resultando aproximadamente em 730 solicitações recebidas e 755 comunicações efetuadas. Conclusões :Esta análise permitiu verificar um incremento acentuado do trabalho desenvolvido pela Base de Dados de Perfis de ADN, desde a criação desta Unidade. Este facto deve-se não só á centralização na BDADN de todo o expediente relacionado com a Base de Dados de Perfis de ADN, anteriormente gerido pelos três laboratórios do SGBF, mas também a diversas ações de sensibilização desenvolvidas junto às autoridades judiciárias com o intuito de sensibilizar para a importância do envio de todas as solicitações para esta Unidade. A gestão concertada demonstrou-se eficiente, porém desafiante, e após o balanço do primeiro ano é possível afirmar que o propósito a que a BDADN se dispôs a cumprir foi realizada com sucesso, consciente, no entanto, dos desafios futuros face à exigência e responsabilidade do trabalho desempenhado, bem como do impacto deste, a nível nacional.