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- Life cycle analysis : a global approachPublication . Figueiredo, Paulo Alexandre Lucas; Raposo, Hugo David Nogueira; Farinha, José Manuel TorresA engenharia e gestão de ativos tem-se revelado cada vez mais decisiva para a eficiência de qualquer organização, bem como para o aumento da fiabilidade dos próprios ativos físicos. A verdade é que este tipo de abordagem não permite apenas encarar um ativo de forma individual e detalhada durante todo o seu ciclo de vida. Permite também encarar de um ponto de vista abrangente, não só considerando o tempo de vida do ativo, mas também todo o histórico da sua tipologia, tal como permite o estudo de continuidade após a sua substituição. Foram realizados dois estudos de caso em que se aplicaram os modelos de Ciclo de Vida Útil e Económica a duas situações distintas: aos ativos de um parque infantil e a ativos específicos de uma indústria pesada. Em ambos os casos, o objetivo foi estimar o tempo ideal de substituição ou de renovação desses ativos. O primeiro, trata-se de um problema em que os dados são muito escassos e em que foi necessário recorrer a várias considerações iniciais arbitrárias. Este estudo demonstrou parte da versatilidade dos modelos aplicados, bem como a sua enorme mais-valia para a engenharia e gestão deste tipo de ativos. Na sequência da apresentação deste caso de estudo no 17º Congresso Nacional de Manutenção e 10º Encontro de Manutenção dos Países de Língua Portuguesa, a atenção centrou-se na aplicação de Modelos de Ciclo de Vida ainda mais rigorosos, mas desta vez na área da indústria pesada. Em cooperação com uma empresa vocacionada para a produção de pasta de papel (Celbi), foi possível obter alguns dados reais de funcionamento da linha de descasque e corte de madeira instalada em meados de 2017. Ao contrário do estudo do ciclo de vida dos parques infantis, foi possível recolher dados reais sobre os custos de exploração. Além disso, trata-se de um ativo que produz um retorno financeiro e, por conseguinte, a área de negócio é diferente. Neste último caso, foram aplicados seis modelos de ciclo de vida - o modelo de Ciclo de Vida Útil e cinco modelos de Ciclo de Vida Económica diferentes. Por este motivo, foram consideradas novas variáveis e diferentes abordagens.
- Implementação da autópsia molecular utilizando Sequenciação de Nova Geração (NGS) no Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências ForensesPublication . Fadoni, Jennifer; Shastakova, Alena; Cainé, Laura; Santos, Agostinho; Amorim, AntónioA morte súbita cardíaca (MSC) pode ser causada por diversas patologias cardíacas, e na população jovem, geralmente é causada por cardiomiopatias e arritmias, que possuem uma base genética. Nestes casos, o indicado é que sejam realizados testes genéticos post-mortem, também conhecidos como autópsia molecular, cujo objetivo é identificar a causa genética que levou à morte. A sequenciação de nova geração (NGS) permite a análise de grandes regiões genómicas de forma rápida e gera uma grande quantidade de informação, sendo uma ferramenta eficaz na determinação das causas moleculares que levaram à morte, e na identificação de biomarcadores que devem ser investigados nos familiares diretos da vítima de MSC. O objetivo do Laboratório de Virologia e de Análises Clínicas e Forenses (LV-ACF) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, INMLCF, foi implementar a aplicação da NGS na análise de amostras biológicas colhidas post-mortem, a cadáveres cuja autópsia médico-legal foi realizada pelo INMLCF e classificada como inconclusiva, com vista a determinar a etiologia molecular de cardiomiopatias e arritmias, utilizando a Sequenciação de Nova Geração para identificar variantes genéticas associadas a estas condições cardíacas. Após a validação dos métodos e dos equipamentos, as autópsias moleculares a partir de amostras colhidas post-mortem pelo INMLCF passaram a ser realizadas pelo LV-ACF, através da utilização de um painel de 62 genes associados a arritmias, e 82 genes associados a cardiomiopatias, num total de 125 genes. Assim, o LV-ACF dotou o INMLCF de capacidade e autonomia no âmbito das autópsias moleculares cardiacas, reduziu custos, possibilitou um maior aproveitamento de recursos, e encetou o caminho para a realização de outros tipos de análises no âmbito da Genética médico-legal, a serem realizadas pelo LV-ACF num futuro próximo.
- Estudo de microrganismos relacionados com infeções sexualmente transmissíveis, em contexto de crimes sexuais em Portugal - resultados preliminaresPublication . Catarina Almeida, Ana; Franco, Magda; Cainé, Laura; Amorim, AntónioOs crimes de agressão sexual são considerados como uma das agressões que merecem especial atenção dentro dos sistemas de justiça e são amplamente condenados pelas sociedades em todo o mundo. Além do impacto associado a relações sexuais não consentidas, a agressão sexual pode ter outras consequências para as vítimas, destacando-se o contacto com agentes responsáveis por infeções sexualmente transmissíveis (ISTs). As vítimas de crimes sexuais constituem uma população importante para a investigação de ISTs, dada a exposição a contactos sexuais forçados e maioritariamente desprotegidos. A subnotificação de casos, diferenças de incidência entre as populações e lacunas no processo de deteção, levam a que existam poucos estudos sobre a prevalência de IST em vítimas de crimes sexuais. No entanto, um estudo conduzido por Sachs et al. (2022) refere que a tricomoníase (12%), a gonorreia (4%) e a clamidiose (2%) são as infeções mais prevalentes entre estas vítimas. O Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, recentemente, passou a disponibilizar a possibilidade de deteção laboratorial de microrganismos envolvidos nas ISTs mais comuns. Deste modo, o principal objetivo deste trabalho é o estudo dos microrganismos associados a ISTs em vítimas de crimes sexuais em Portugal, através de zaragatoas colhidas das vítimas de casos de agressão sexual para identificação do agressor. Este estudo reflete uma inovação e otimização na aplicação destas metodologias, dado que permitem o uso de uma amostra para identificar o agressor e em simultâneo detetar a presença de microrganismos relacionados com ISTs. Os resultados preliminares deste estudo, desde logo, já permitiram concluir que é possível detetar Trichomonas vaginalis e Chlamydia trachomatis em zaragatoas com amostra colhida e armazenada por um período superior a 2 anos. Neste alinhamento, estes microrganismos associados a tricomoníase e clamidiose já foram detetados em vítimas de crimes sexuais em estudos anteriores.
- Validação do equipamento SeqStudio Genetic Analyzer para os kits GlobalFiler, PowerPlex Fusion 6C e YFiler Plus no SGBF-NPublication . Ferreira Da Silva, Benedita; Carvalho, Beatriz; Mota, Ricardo; Amorim, António; Lima, GabrielaA Acreditação Laboratorial constitui um processo de avaliação da qualidade dos serviços e dos exames realizados num laboratório. Um laboratório acreditado pode, mais facilmente, aperfeiçoar processos, identificar falhas, tornar os seus procedimentos internos mais bem estruturados e otimizar o fluxo de trabalho. Desta forma, existe uma segurança e precisão acrescidas nos resultados obtidos e consequente emissão dos relatórios periciais, melhorando a qualidade dos serviços prestados às Entidades Requisitantes. O Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação Norte (SGBF-N), um serviço acreditado, tem os kits comerciais mais utilizados na rotina laboratorial validados (GlobalFiler™ PCR Amplification Kit, PowerPlex® Fusion 6C System e Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit). Esta validação foi realizada utilizando o equipamento 3500 Genetic Analyzer (3500). Com a aquisição de novos equipamentos, nomeadamente do SeqStudio™ Genetic Analyzer (SeqStudio™), por forma a manter a segurança nos resultados obtidos, é necessária fazer uma validação dos kits referidos neste equipamento. A validação deste equipamento passou por 3 etapas: determinação dos limiares analíticos, comparação de amostras aplicadas/analisadas nos dois equipamentos (3500 e SeqStudio™) e determinação dos limiares de stutter. Neste trabalho é pretendido apresentar os resultados obtidos que permitirão a utilização do equipamento dentro do âmbito da Acreditção para estes kits comerciais.
- ADN mitocondrial: Estudo de validação interna de metodologia de sequenciaçãoPublication . Domingos, Margarida; Afonso Costa, Heloísa; Nascimento, Rui; Feiteiro, Mariana; Corte Real, Francisco; Amorim, AntónioEm genética forense, a sequenciação do ADN mitocondrial (ADNmt) pode ser uma ferramenta crucial designadamente sempre que não é possível obter ADN nuclear (ADNn) analisável, a partir das amostras biológicas. Amostras recolhidas em cadáveres em avançado estado de decomposição e cabelos ou pêlos recolhidos em local de crime são exemplos de amostras biológicas a partir das quais a análise do ADNmt pode ser o único meio de prova genético. O ADNmt é vantajoso por existir em maior quantidade do que o ADNn, mas tem a desvantagem de ser um elemento não individualizante, sendo comum a todos os indivíduos da mesma linhagem materna. O Serviço de Genética e Biologia Forenses (SGBF) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF), está a implementar a sequenciação massiva em paralelo (MPS), sequenciação de segunda geração. A MPS, relativamente à técnica de sequenciação de Sanger (SS), tem como vantagens, desde logo, permitir sequenciar o genoma mitocondrial completo e oferecer a capacidade de analisar múltiplas amostras biológicas em simultâneo. Com o objetivo de implementar e validar a sequenciação do genoma mitocondrial por MPS foi avaliada a concordância entre as metodologias SS e MPS. Foram selecionadas 64 amostras biológicas, previamente estudadas e analisadas pela metodologia SS. Para o estudo pela metodologia MPS as amostras foram extraídas com PrepFiler Express BTA™ Forensic DNA Extraction Kit e quantificadas com Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit. A preparação de bibliotecas de ADNmt foi feita num equipamento Ion Chef™ com o Precision ID mtDNA Whole Genome Panel e o Precision ID DL8 Kit. Na quantificação das bibliotecas de ADNmt foi utilizado o Ion Library TaqMan™ Quantitation Kit. A preparação do template e carregamento do Ion 530™ Chip foi realizada no Ion Chef™ com os kits Ion S5™ Precision ID Chef & Sequencing Kit. A sequenciação, através da deteção de alterações de pH provocada pela libertação de iões de hidrogénio (H+), ocorridas durante a polimerização do ADN e incorporação de bases, foi realizada num Ion GeneStudio™ S5 System e em conjunto com o sistema Ion Torrent™ que determinou a sequência da molécula em estudo, transformando o sinal químico em sinal digital. A análise e determinação do haplótipo do ADNmt foi realizada com o Converge™ Software. O haplótipo de ADNmt determinado com as metodologias SS e MPS foi coincidente em todas as amostras. Adicionalmente, a metodologia MPS aumentou a eficiência e precisão na análise das amostras de ADNmt. A simplicidade do sistema MPS elimina a necessidade de utilização de nucleotídeos modificados, de lasers, scanners e câmaras de deteção, garantindo exatidão na deteção dos polimorfismos. Este sistema garante ainda uma cobertura homogénea da sequência em estudo, até mesmo em regiões ricas em conteúdo GC e regiões homopoliméricas.
- A transexualidade e as perícias em Genética Forense - "a case report"Publication . Fadoni, Jennifer; Ferreira Da Silva, Benedita; Amorim, AntónioA identidade de género e as questões relacionadas com a mudança de sexo têm tido uma importância cada vez maior, tornando-se um relevante ponto de debate e de estudo nos últimos anos. A pessoa transgénero teve um sexo atribuído à nascença que difere daquele com o qual se identifica atualmente. Os dados relativos à prevalência da população transgénero ainda são bastante escassos e dependem da própria definição. Todavia, estimativas sugerem que a prevalência da identidade transgénero varia entre 0,3-0,5% na população norte americana. Enquanto o género pode ser alterado, por exemplo recorrendo procedimentos cirúrgicos e tratamentos hormonais, a informação genética associada à pessoa transgénero não se altera ao longo da sua vida. Assim, numa perícia que requeira a determinação do perfil genético do indivíduo, se os peritos não tiverem conhecimento prévio da alteração de género, os resultados obtidos poderão suscitar dúvidas e até colocar em causa a perícia e a emissão de resultados. Neste trabalho apresentamos o caso de um indivíduo condenado que foi requisitado ao SGBF-N para obtenção do seu perfil genético para inserção da Base de Dados de Perfis de ADN. Aquando da requisição, o indivíduo em questão era identificado civil e judicialmente como pertencente ao género masculino; todavia, no momento da colheita das amostras biológicas o seu género já havia sido alterado legalmente para feminino, tendo inclusivamente alterado o seu nome e documento de identificação. Aquando da receção das amostras, só foi possível associar à requisição original, porque a entidade requisitante forneceu a informação de que o indivíduo em questão ao longo do processo teve o seu género alterado e confirmou a identidade inicial do condenado. As amostras foram registadas no sistema informático considerando a identidade de género atual, feminino, enquanto o perfil genético obtido pertence a um indivíduo do sexo masculino. Este caso demonstra a importância de se debater as questões deste tipo e como é importante ter toda informação possível, para que a perícia não possa ser posta em causa.
- Determinação de rivastigmina, inibidor seletivo da colinesterase cerebral, em amostras de sangue. Aplicação a casos forenses.Publication . Proença, Paula; Castanheira, Alice; Mustra, Carla; Castanheira, Fernando; Franco, João Miguel; Corte Real Gonçalves, FranciscoIntodução: Sempre que ocorre uma situação relevante de pesquisa de um fármaco não incluído no leque de substâncias detetadas, o laboratório dedica-se a implementar a sua técnica de modo a poder ser dada uma resposta à perícia solicitada. A rivastigmina é um inibidor das colinesterases do tipo carbamato, utilizada no tratamento de demência associada à doença de Alzheimer e à doença de Parkinson. Material e Métodos: No procedimento analítico de determinação de rivastigmina, as amostras biológicas foram previamente extraídas por precipitação proteica, utilizando 0,1 mL de amostra, e posteriormente analisadas por LC-MS/MS. A separação cromatográfica foi efetuada com uma coluna de fase reversa e uma fase móvel, em gradiente, constituída por formato de amónia aquoso 2mM e por metanol, a um fluxo de 0,4 mL/min. Na análise por MS/MS foi utilizado um triplo quadrupolo com ionização por electrospray (ESI). A aquisição de dados por monitorização de reações múltiplas (MRM) foi utilizada na deteção e quantificação de rivastigmina (RT= 4,22), de acordo com as seguintes transições: m/z 251,2>206,1 e m/z 251,2>86,2, em modo ESI positivo. Resultados e Discussão: Na validação da técnica analítica apresentada foram avaliados os parâmetros incluídos no procedimento interno de validação de métodos qualitativos e quantitativos em vigor no laboratório de toxicologia forense. Para a quantificação de rivastigmina foi utilizada uma curva de calibração com concentrações compreendidas entre 5 a 100 ng/mL e controlos ajustados a essa gama de trabalho. Foi ainda avaliada a precisão a dois níveis, a 10 e a 50 ng/mL, a precisão intermédia e o limite de repetibilidade (<20%). Quanto à exatidão, a rivastigmina apresenta recuperações médias estatisticamente semelhantes a 100%, comprovando a inexistência de erro sistemático. O método foi aplicado a 8 casos forenses com concentrações sanguíneas de rivastigmina entre 8,1 a 78 ng/mL. Os resultados obtidos da análise de rivastigmina por procedimentos de triagem, de confirmação e de quantificação foram avaliados. Conclusões: O método validado demonstrou ser seletivo, específico, exato, preciso, robusto e linear na gama de trabalho, cumprindo todos os critérios de aceitação exigidos na determinação deste tipo de substâncias em amostras biológicas analisadas no âmbito da toxicologia forense.
- Estudo comparativo e de validação de ensaios de quantificação de DNA, total e fração masculina, em amostras forenses, com diferentes metodologias e equipamentosPublication . Feiteiro, Mariana; Afonso Costa, Heloísa; Nascimento, Rui; Domingos, Margarida; Cunha, Eugénia; Corte Real, Francisco; Amorim, AntónioA Genética Forense utiliza o DNA como o alvo de análise, sendo este um dos objetos de estudo mais importantes na análise forense, devido ao seu elevado potencial de individualização. A análise das amostras biológicas é realizada com o intuito de identificar o perfil genético dos vários envolventes, sendo que a quantidade de DNA presente nas mesmas pode variar consideravelmente, dependendo dos fatores a que estão expostas, o que poderá colocar em causa a obtenção do seu perfil genético. A quantificação do DNA no âmbito da Genética Forense tem um papel relevante para a obtenção de bons resultados, permitindo a análise da quantidade e qualidade do DNA presente numa amostra biológica, de forma a adaptar o restante protocolo para a obtenção de perfis genéticos ideais. A técnica de qPCR é considerada uma das mais precisas e sensíveis para quantificação de DNA, permitindo acompanhar em tempo real, ciclo a ciclo, o produto amplificado, através da alteração no sinal de fluorescência, detetado pelo termociclador. Para a implementação e utilização de um método é necessária a sua prévia validação, de forma a testar as suas capacidades e determinar vantagens e desvantagens do mesmo. No Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul (SGBF-S) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF), procedeu-se à validação interna de dois procedimentos de quantificação de DNA: os kits Quantifiler Trio e Investigator Quantiplex aplicados aos equipamentos QuantStudio 5 Real-Time PCR System for Human Identification e CFX Opus 96 Real-Time PCR System, respetivamente. Ambos os kits apresentam como alvos de amplificação duas regiões de DNA autossómico, uma large e uma small, e uma região alvo masculina. Relativamente aos equipamentos estudados, estes utilizam um conjunto de até 6 filtros associados a determinados corantes fluorescentes, que permitem a deteção de fluorescência na amostra, traduzindo-se na quantificação de DNA na mesma. A validação dos dois ensaios foi baseada no documento de validação interna do serviço, Procedimento Geral de Validação de Ensaios, dos quais foram testados, através de amostras controlo de concentração conhecida, diversos parâmetros: especificidade, sensibilidade, repetibilidade, reprodutibilidade e capacidade de diferenciação de misturas de material genético feminino e masculino, assim como a análise de amostras reais de forma a mimetizar a rotina laboratorial. Até ao momento, através dos estudos realizados, permite-se afirmar que ambos os ensaios são específicos para DNA humano e têm vindo a apresentar resultados semelhantes e esperados para os parâmetros em estudo. Contudo, constatou-se que não é possível a determinação do índice de degradação no ensaio do kit Investigator Quantiplex, devido à incompatibilidade na deteção do fluoróforo correspondente ao fragmento de DNA large, necessário para o cálculo do mesmo.
- Como o SGBF-N pode auxiliar num caso de Tráfico Humano – case reportPublication . Ferreira da Silva, Benedita; Fadoni, Jennifer; Abrantes, David; Amorim, AntónioTodos os anos estima-se que sejam traficadas milhões de pessoas por todo o mundo. O tráfico de seres humanos pode ter diferentes finalidades, como exploração sexual, laboral, tráfico de órgãos, adoções ilegais, entre outras. As crianças e mulheres continuam a ser as principais vítimas de tráfico, sendo uma realidade à escala global. Neste trabalho pretendemos reportar um caso de suspeita de tráfico humano, com finalidade de adoção, em Portugal, no qual os supostos pais só poderiam ficar em prisão preventiva apenas por 24 horas e era essencial perceber qual o destino a dar à menor, ainda bebé. Iremos explicar como, em menos de 12 horas após colheita das amostras biológicas, foi possível, em colaboração com a Polícia Judiciária, entregar o relatório pericial. As amostras foram extraídas com o buffr Prep-n-Go e processadas com os kits comerciais GlobalFiler e PowerPlex Fusion 6C (amplificação e tipagem), seguindo as normas do PE da Qualidade do SGBF-N. O grau de parentesco entre os supostos pais e a menor foi avaliado, verificando-se ausência total de parentesco entre qualquer um dos supostos progenitores e a menor. Sem o relatório do SGBFN entregue atempadamente, o tribunal não teria os dados necessários para poder realizar uma decisão informada e poderia correr o risco dos supostos progenitores tentarem uma fuga com a menor. Este caso evidencia como o SGBFN, perante uma situação de urgência máxima, foi capaz de dar uma resposta conclusiva e célere auxiliando na aplicação da justiça.
- Estágio na Câmara Municipal de EntroncamentoPublication . Costa, Hilia TrindadeNo final do segundo semestre do terceiro ano da licenciatura do curso Gestão de Recursos Humanos e Comportamento organizacional, é realizado um estágio curricular. Estágio este que teria uma duração de um total de 270 horas, valendo 10 ECTS. O estágio curricular visa oferecer aos alunos uma experiência profissional, na fase final do respetivo curso, possibilitando uma mais fácil inserção no mercado de trabalho. Tem como principal objetivo oferecer-nos o conhecimento pratico das funções profissionais, o mesmo possibilita-nos um contacto empírico com os apontamentos teóricos que nos são passadas em salas de aula. Trata-se do entendimento, consolidado pelos professores, de que a teoria, sem a prática, é incompleta, prejudicando o acesso imediato ao mercado de trabalho e o estágio curricular visa superar este problema. No final do estágio curricular, é realizada um relatório de estágio que é apresentada como uma condição para a finalização da Licenciatura em Gestão de Recursos Humanos e Comportamento Organizacional, na Escola Superior de Gestão de Tomar, no Instituto Politécnico de Tomar, sendo que este se baseia na descrição, explicação e exposição das tarefas e atividades realizadas ao longo do estágio.