Repositório Comum
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Recent Submissions
Identificação de espécie animal: Métodos de análise nos Laboratórios do Porto do SGBF INMLCF
Publication . Lima, Gabriela; Fadoni, Jennifer; Shastakova, Alena; Amorim, António
A identificação da espécie em amostras biológicas no âmbito de perícias forenses pode ser muito importante, contribuindo para a resolução de investigações judiciais. É um tipo de análise que se tem tornado mais relevante, principalmente nas investigações criminais que envolvem o comércio e caça ilegal de espécies protegidas, a etiquetagem fraudulenta de produtos alimentares e a análise de vestígios biológicos encontrados em locais de crimes. Para além dos métodos clássicos para a identificação da espécie, baseados em características físicas, atualmente são utilizadas metodologias baseadas nas características genéticas, analisando-se genes específicos, característicos de cada espécie. A análise do ADN mitocondrial (mtDNA) é muito utilizada para a identificação da espécie, por possuir genes que apresentam grande variabilidade entre espécies, mas que se encontram bem conservados dentro de cada espécie, permitindo assim a sua identificação. Os genes do mtDNA mais utilizados na identificação da espécie são o citocromo b (cytb), o citocromo c oxidase sub-unidade 1 (CO1), o RNA ribossómico 12S (12S rRNA) e o RNA ribossómico 16S (16S rRNA). Pretende-se, neste trabalho, apresentar as metodologias disponíveis no SGBF-N para a identificação da espécie.
Atualmente, no SGBF-N, a análise da identificação da espécie pode ser feita utilizando dois tipos distintos de metodologias:
1. A análise de SPInDel, que permite a identificação da espécie através da análise de fragmentos que variam em comprimento devido a inserções e/ou deleções, característicos de cada espécie.
2. A análise dos genes do cytb, 12S rRNA e 16S rRNA, utilizando as técnicas de PCR e sequenciação tradicional de Sanger.
O SGBF-N tem contribuído de forma significativa para a resolução de casos forenses, permitindo a identificação precisa de materiais biológicos de origem animal envolvidos em contextos criminais e outras situações de interesse pericial.
Utilizando as metodologias referidas para identificação de espécie, o SBGF-N já auxiliou na investigação de diversos processos no âmbito forense. Dentro de tais processos, estão a identificação de um fragmento de tecido muscular, encontrado num cemitério, embalado dentro de um saco de plástico e enterrado a cerca de 20cm de profundidade e de um coração encontrado na porta de um posto da GNR. Através da análise da identificação da espécie, o SGBF-N conseguiu dar resposta à questão colocada e identificou tais materiais como pertencendo a indivíduos da espécie Bos taurus (vaca) e Sus scrofa (porco), respetivamente.
Autópsia molecular -identificação de variante genética patogénica em vítima de morte súbita infantil
Publication . Fadoni, Jennifer; Shastakova, Alena; Rodrigues, Joana; Mofreita, Vânia; Santos, Agostinho; Amorim, António; Cainé, Laura
Introdução: A morte súbita infantil (MSI) é um fenómeno inesperado e trágico que afeta lactentes aparentemente saudáveis, com menos de um ano de idade, e cuja causa permanece inexplicada mesmo após a realização de uma autópsia médico-legal. As autópsias moleculares surgem como uma ferramenta fundamental neste contexto, complementando as análises tradicionais ao permitir a deteção de variantes genéticas que podem estar associadas a patologias cardíacas hereditárias, distúrbios metabólicos ou outras patologias de difícil diagnóstico post-mortem.
Métodos: Durante a autópsia de um bebê do sexo masculino de 7 semanas vítima de MSI, foi colhida uma mancha de sangue, a qual foi enviada ao Laboratório de Análises Clínicas e Médico-Legais acompanhada da requisição para análise de 2 painéis de genes: Arritmias_v1 (62 genes) e Cardiomiopatias_v1 (82 genes). Foi realizada a extração de DNA com o kit PrepFiler Express (TermoFisher Scientific - TFS), e o produto de extração foi quantificado com o kit Quantifiler Trio (TFS). A preparação das bibliotecas, dos templates e sequenciação NGS – Método Ion Torrent (TFS) foi realizada de acordo com as instruções do fabricante. Foram sequenciadas as regiões codificantes dos genes contidos nos painéis de genes requisitados e a variante patogénica encontrada foi confirmada por sequenciação pelo método de Sanger.
Resultados e Discussão: Após análise bioinformática e classificação das variantes, a variante c.5125G>A p.Val1709Met no gene SCN5A, encontrada em heterozigotia, foi classificada como patogénica. A variante em questão resulta numa substituição do aminoácido valina por metionina numa posição crítica do gene, a unidade S6 do domínio transmembranar IV. O SCN5A está associado a diversas doenças cardiovasculares, como as Síndromes de Brugada e do QT longo. Esta variante não se encontra presente em bases de dados populacionais, o que reforça a sua raridade. Ferramentas computacionais indicam que esta alteração é provavelmente prejudicial, devido à grande conservação do aminoácido afetado e à natureza significativa da mudança química. Variantes nesta posição já foram observadas em doentes, incluindo casos pediátricos, e estudos realizados com cardiomiócitos derivados de células de doentes mostraram um aumento do corrente tardio de sódio, o que leva a um prolongamento da duração do potencial de ação cardíaco.
Conclusões: A identificação desta variante no gene associado a importantes síndromes cardíacas hereditárias, fornece uma explicação genética para a morte súbita deste bebé às 7 semanas de vida. A evidência funcional e clínica disponível indica que a alteração provoca um ganho de função do canal de sódio cardíaco, predispondo a arritmias potencialmente fatais. Este achado reforça a importância da autópsia molecular na investigação da MSI, permitindo não só esclarecer a causa da morte, mas também identificar familiares em risco que poderão beneficiar de acompanhamento clínico e medidas preventivas.
Deteção de infeções sexualmente transmissíveis -contributo do LAC-ML no contexto de agressões sexuais
Publication . Fadoni, Jennifer; Mofreita, Vânia; Rodrigues, Joana; Franco, Magda; Shastakova, Alena; Magalhães, Jéssica; DE SOUSA MAGALHÃES, JÉSSICA; Correia Dias, Maria Helena; Balsa, Filipa; Cainé, Laura; Amorim, António
Introdução: Os crimes de natureza sexual constituem um grave problema de saúde pública,
com elevada prevalência, particularmente entre mulheres, e possíveis consequências físicas, psicológicas e reprodutivas para os sobreviventes. Entre estas, as infeções sexualmente transmissíveis (IST) assumem particular relevância, tanto pelo seu caráter frequentemente assintomático como pelo potencial de causar complicações a longo prazo. A deteção de IST em contextos de agressão sexual é crucial não só para a adequada gestão clínica das vítimas,
como também para fornecer suporte probatório no âmbito da investigação criminal. Objetivos: Foram analisadas amostras colhidas no âmbito de casos de possíveis agressões sexuais, com o objetivo de detetar a presença de IST. Material e Métodos: Foram analisadas 59 amostras biológicas incluindo soro sanguíneo (n=49), urina (n=5), e exudados vaginal (n=1), vulvar (n=1), anal (n=1), cervical (n=1) e perianal (n=1), nas quais foram pesquisadas a presença de Chlamydia trachomatis (IgG, IgM, DNA), Neisseria gonorrhoeae (IgG, IgM, DNA), Trichomonas vaginalis (IgG, IgM, DNA), Treponema pallidum (IgG, IgM, DNA), Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum (DNA), Mycoplasma hominis e Mycoplasma genitalium (DNA), HIV 1/2 (Ac Totais, Ag p24, RNA), Hepatite B (Ag HBs, Ac HBs, Ac totais, IgM HBc), Hepatite C (IgG), Papiloma virus humano (IgG), Herpes-virus simplex tipo 2 (IgG, IgM), de acordo com o solicitado pela entidade requisitante. Resultados e Discussão: Os indivíduos analisados possuíam idades entre 12 e 72 anos. Todas as supostas
vítimas eram do sexo feminino (22 amostras), enquanto 36 amostras eram provenientes de agressores do sexo masculino e 2 do sexo feminino. Nos supostos agressores, foi detetada C. trachomatis (IgG) em 1 indivíduo do sexo feminino e 3 do sexo masculino, incluindo em um desses a deteção de T. pallidum (IgG); e HIV 1/2 (Ac Totais) em 1 indivíduo do sexo masculino. Entre as
alegadas vítimas, foi detetada C. trachomatis (DNA) em uma mulher de 73 anos de idade; e Hepatite B, (Ag HBs) numa jovem de 12 anos de idade, sugerindo uma infeção ativa. Estes achados reforçam a importância da investigação laboratorial em casos de alegada agressão sexual, e reforçam a sensibilidade dos métodos utilizados, que permitem a deteção de agentes infeciosos mesmo em indivíduos assintomáticos. Conclusões: A deteção laboratorial de IST em contexto forense revela-se fundamental na abordagem integrada a vítimas de violência sexual, permitindo não só um acompanhamento clínico mais eficaz, como também a produção de informação
relevante para fins judiciais. O papel dos laboratórios forenses, como o Laboratório de Análises Clínicas e Médico-Legais (LAC-ML), é determinante na resposta coordenada às agressões sexuais, promovendo uma abordagem baseada em evidência científica, respeito pela vítima e suporte à justiça. Reforça-se, assim, a necessidade de protocolos bem definidos e da capacitação contínua dos profissionais envolvidos neste tipo de perícias.
O cromossoma X em investigações de parentesco biológico - casos de estudo
Publication . Dourado, Catarina; Dario, Ana Rita; Garcia, Rita; Amorim, António; Carvalho, Mónica
Em investigações de parentesco biológico recorre-se, habitualmente, ao estudo de polimorfismos de short tandem repeats (STRs) autossómicos para obtenção do perfil genético dos indivíduos e posterior averiguação de possíveis relações biológicas. No entanto, surgem por vezes perícias complexas, sejam devidas ao tipo de intervenientes da perícia, sejam devidas a alterações genéticas (mutações), que exigem o recurso a outro tipo de marcadores genéticos, nomeadamente STRs dos cromossomas sexuais, tanto do cromossoma Y como do cromossoma X. No caso do cromossoma X, o seu padrão de hereditariedade faz com que seja frequentemente utilizado em situações de ausência de um dos progenitores. O presente trabalho tem como principal objetivo expor alguns casos de investigações de parentesco biológico em que a análise do cromossoma X se revelou de extrema importância para a sua resolução, tanto em casos de um trio (pretenso pai - mãe - filha), como em situações de ausência de pelo menos um progenitor biológico, tanto em casos de exclusão como em casos de não exclusão. Relativamente à metodologia laboratorial, as amostras biológicas foram extraídas com Prep-n-Go Buffer (Applied Biosystems™) e com Chelex® 100 (Sigma-Aldrich®), amplificadas para STRs autossómicos com os kits GlobalFiler™ PCR Amplification Kit (Applied Biosystems™) e PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation), e amplificadas para STRs do cromossoma X com Investigator® Argus X-12 QS Kit (Qiagen). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). A análise estatística foi realizada utilizando o programa Familias 3. A análise de STRs do cromossoma X nos casos apresentados revela-se fundamental como reforço dos resultados dos STRs autossómicos no sentido de não exclusão da paternidade em perícias com valores baixos de IP devido, por exemplo, a mutações ou alelos nulos, e também como reforço de exclusão em perícias sem amostra de pretenso pai.
O relacionamento entre pares no interior e no exterior em jardim-de-infância e creche
Publication . Marques, Dina Sofia Santos; Vale, Vera Maria Silvério do, 1961-
As interações entre crianças na primeira infância são essenciais para o seu desenvolvimento psicossocial, desempenhando um papel vital na sua adaptação e crescimento (Michel Boivin, 2005, p. 5).
“Através do relacionamento entre pares, a criança não só se submete a diversas competências sociais como também aveza normas e métodos sociais interligados nas relações interpessoais” (Michel Boivin, 2005, p. 5).
Presentemente, esta temática, tem particular relevância, pois a criança é exposta aos mais variados relacionamentos, antes de entrar na creche/jardins de Infância e até mesmo na interação com os irmãos ou familiares próximos.
O presente relatório foi elaborado no âmbito do mestrado em Educação Pré-Escolar. Tem como objetivo primordial perceber se há diferenças no estabelecimento de relações entre pares no exterior e no interior da creche e jardim de infância. Pretendeu-se perceber a diferença de comportamento na criação de relações entre as crianças e, analisar a relação de proximidade que cada criança tem com os diferentes pares, gerando estratégias facilitadoras para a integração e interação das crianças no grupo.
Pelo estudo feito percebeu-se que em contexto de jardim-de-infância e, particularmente no espaço exterior, o grupo de crianças estabelece um grande número de experiências com pares, assim como os seus conhecimentos sobre diversos assuntos (emoções, invenção de jogos etc.), desenvolvendo muito mais facilmente as suas relações com os pares, entreajudando-se e aprendendo uns com os outros, no entanto, no interior, o mesmo não se verifica.
Em contexto de creche o grupo demonstrou através da sua rotina diária, no exterior, que o ambiente e as brincadeiras em pares (relações entre pares), são muito mais enriquecedores e vantajosas, observando-se bastante o espírito de entreajuda e as parti-lhas das experiências pelo grupo. Já no interior o mesmo não se verifica, uma vez que os conflitos são recorrentes, existindo também uma maior confusão de interesses.