Loading...
49 results
Search Results
Now showing 1 - 10 of 49
- LC-MS/MS-MS3 for determination and quantification of ∆9-tetrahydrocannabinol and metabolites in blood samplesPublication . Proença, Paula; Martinho, Beatriz; Teixeira, Helena; Monteiro, Carla; Simões, Susana; Franco, João; Corte Real, F.Due to the high prevalence of cannabinoids in forensic toxicology, it is crucial to have an efficient method that allows the use of a small sample amount and that requires a minimal sample preparation, for the determination and quantification of low concentrations. A simple, highly selective and high throughput liquid chromatography tandem mass spectrometry method (LC-MS/MS-MS3) was developed for the determination and quantification of ∆9-tetrahydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-∆9-THC (THC-OH) and 11-nor-∆9-THC-9-carboxylic acid (THC-COOH) in blood samples. Chromatographic analysis was preceded by a protein precipitation of 0.1 mL of blood samples with acetonitrile, then THC, THC-OH, THC-COOH and deuterated internal standards were separated on an Acquity UPLC® HSS T3 (100 mm x 2.1 mm i.d., 1.8 mm) reversed-phase column using a gradient elution with 2 mM aqueous ammonium formate (0.1% formic acid) and methanol, at a flow rate of 0.4 mL/min, and with a run time of 10 min. For MS/MS-MS3 analysis, a SCIEX QTRAP® 6500+ linear ion trap triple quadrupole mass spectrometer was used via electrospray ionization (ESI), operated in multiple reaction mode (MRM) and linear ion trap mode (MS3). The method was validated in accordance with international accepted criteria and guidelines. The method was selective and linear between 0.5-100 ng/mL (r2>0.995). The lower limits of quantification (LLOQ) corresponded to the lowest concentrations used for the calibration curves. The coefficients of variation obtained for accuracy and precision were less than 15%. The mean recoveries were between 88.0-101.4% for the studied concentration levels (1 ng/mL, 5 ng/mL and 50 ng/mL). No significant interfering compounds, matrix effects or carryover were observed. The validated method provides a sensitive, efficient and robust procedure for the quantitation of cannabinoids in blood using LC–MS/MS-MS3 and a sample volume of 0.1 mL. This work is also a proof of concept for using LC-MS3 technique to determine drugs in biological samples.
- Análise do trabalho desenvolvido durante o primeiro ano da Unidade de Base de Dados de Perfis de ADNPublication . Bogas, Vanessa; Cardoso, Paula; Bento, Ana; Real, F. Corte; Brito, PedroIntrodução : A 1 de janeiro de 2023 à Unidade de Base de Dados de Perfis de ADN (BDADN) iniciou funções assumindo, para além da gestão do software responsável pelo armazenamento de perfis genéticos, a inserção de perfis genéticos e respetivos dados, a análise e comunicação de coincidências e resposta a solicitações de dados pessoais e processuais, a administração de todas as restantes solicitações dirigidas ao Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses (INMLCF), a nível nacional, no âmbito da Base de Dados de ADN, como por exemplo, pedidos de colheita e inserção, até então sob a responsabilidade do Serviço de Genética e Biologia Forenses. A BDADN é certificada pela NP EN ISO 9001:2015, desde o início de 2022, pelo que, a toda a responsabilidade anteriormente descrita, acresce também a manutenção dos requisitos de qualidade exigidos por esta norma. Com este estudo pretende-se fazer uma caracterização geral do trabalho desenvolvido por esta Unidade, durante o primeiro ano de atividade, especialmente no que diz respeito a comunicações com entidades externas e internas ao INMLCF. Material e Métodos: Para a realização deste estudo, foi feito o levantamento dos processos criados no software de gestão documental EdocLink, entre 1 de janeiro e 31 de dezembro de 2023, particularizando as solicitações recebidas de autoridades judiciárias nacionais, provenientes de outras entidades no âmbito de cooperações internacional, precedentes dos laboratórios, e ainda todas as comunicações enviadas aos laboratórios e autoridades judiciárias, no período acima referido. Posteriormente, com recurso ao software Excel, os dados foram analisados permitindo fazer uma avaliação do trabalho desenvolvido da BDADN, afetos às tarefas anteriormente referidas, durante o ano de 2023. Resultados e Discussão Após a análise dos dados verifica-se que, durante o ano de 2023, foram criados 7578 processos em EdocLink no contexto dos quais foram recebidas 8762 solicitações das diversas entidades acima referidas, resultando em 9061 comunicações efetuadas. Com o intuito de avaliar o volume de trabalho no contexto referido, foi calculado um valor médio mensal, resultando aproximadamente em 730 solicitações recebidas e 755 comunicações efetuadas. Conclusões :Esta análise permitiu verificar um incremento acentuado do trabalho desenvolvido pela Base de Dados de Perfis de ADN, desde a criação desta Unidade. Este facto deve-se não só á centralização na BDADN de todo o expediente relacionado com a Base de Dados de Perfis de ADN, anteriormente gerido pelos três laboratórios do SGBF, mas também a diversas ações de sensibilização desenvolvidas junto às autoridades judiciárias com o intuito de sensibilizar para a importância do envio de todas as solicitações para esta Unidade. A gestão concertada demonstrou-se eficiente, porém desafiante, e após o balanço do primeiro ano é possível afirmar que o propósito a que a BDADN se dispôs a cumprir foi realizada com sucesso, consciente, no entanto, dos desafios futuros face à exigência e responsabilidade do trabalho desempenhado, bem como do impacto deste, a nível nacional.
- Mortality due to respiratory infections: an alert study before COVID-19 pandemicPublication . Gi, Andreia; Henriques de Gouveia, Rosa; Corte Real, Francisco; Carvalho, LinaObjective. Respiratory tract infections remain a common problem in clinical practice with high morbidity and mortality worldwide. In Portugal, pneumonia was the third leading death cause in 2018. Due to COVID-19 pandemic, there is a growing concern about the burden of respiratory diseases and preventable risk factors. The present study started before the pandemic and its aim was to determine the occurrence of pneumonia/bronchopneumonia in a postmortem series and to characterize its circumstantial context. Methods. A retrospective anatomopathological study was performed on cases with acute pneumonia/bronchopneumonia at the Medicolegal Portuguese Institute (2011-2017). Results. In an autopsy series of 737 patients, 521 were male and 675 presented comorbidities. The mean age was 63.87 ± 19.8 years. The most common acquisition site was community (65.1%), as natural death (65.5%). Concerning the manner of death, most cases (48.0%) were sudden deaths, followed by accidents (29.2%). A statistically significant association was observed between the medicolegal etiology and the place of infection acquisition, with higher prevalence of natural obitus (91.0%) in community-acquired pneumonia/bronchopneumonia versus higher prevalence of violent obitus in hospitalacquired pneumonia/bronchopneumonia (82.1%) (p < 0.001). Conclusions. Forensic anatomopathological postmortem data may contribute to better understand community and hospital pulmonary infections.
- Challenges and (Un)Certainties for DNAm Age Estimation in FuturePublication . Correia Dias, Helena; Cunha, E; Corte Real, F.; Manco, LicínioAge estimation is a paramount issue in criminal, anthropological, and forensic research. Because of this, several areas of research have focused on the establishment of new approaches for age prediction, including bimolecular and anthropological methods. In recent years, DNA methylation (DNAm) has arisen as one of the hottest topics in the field. Many studies have developed age- prediction models (APMs) based on evaluation of DNAm levels of many genes in different tissue types and using different methodological approaches. However, several challenges and confounder factors should be considered before using methylation levels for age estimation in forensic contexts. To provide in-depth knowledge about DNAm age estimation (DNAm age) and to understand why it is not yet a current tool in forensic laboratories, this review encompasses the literature for the most relevant scientific works published from 2015 to 2021 to address the challenges and future directions in the field. More than 60 papers were considered focusing essentially on studies that developed models for age prediction in several sample types
- A Blood–bone–tooth model for age prediction in forensic contextsPublication . Correia Dias, Helena; Manco, Licínio; Corte Real, F.; Cunha, EThe development of age prediction models (APMs) focusing on DNA methylation (DNAm) levels has revolutionized the forensic age estimation field. Meanwhile, the predictive ability of multi-tissue models with similar high accuracy needs to be explored. This study aimed to build multi-tissue APMs combining blood, bones and tooth samples, herein named blood–bone–tooth-APM (BBT-APM), using two different methodologies. A total of 185 and 168 bisulfite-converted DNA samples previously addressed by Sanger sequencing and SNaPshot methodologies, respectively, were considered for this study. The relationship between DNAm and age was assessed using simple and multiple linear regression models. Through the Sanger sequencing methodology, we built a BBT-APM with seven CpGs in genes ELOVL2, EDARADD, PDE4C, FHL2 and C1orf132, allowing us to obtain a Mean Absolute Deviation (MAD) between chronological and predicted ages of 6.06 years, explaining 87.8% of the variation in age. Using the SNaPshot assay, we developed a BBT-APM with three CpGs at ELOVL2, KLF14 and C1orf132 genes with a MAD of 6.49 years, explaining 84.7% of the variation in age. Our results showed the usefulness of DNAm age in forensic contexts and brought new insights into the development of multi-tissue APMs applied to blood, bone and teeth
- Avaliação Direta do Kit Investigator® 26plex QS com outros Kits utilizados na rotina laboratorial do SGBF-CPublication . Cardoso, Paula; Serra, Armando; Bogas, Vanessa; Balsa, Filipa; Lopes, Virgínia; Cunha, Patrícia; Shataskova, Alena; São Bento, Marta; Bento, Ana Margarida; Sampaio, Lisa; Porto, Maria João; Amorim, António; Corte Real, F.; Brito, PedroA identificação individual carece do estudo e caracterização de marcadores polimórficos presentes no ADN, sendo a análise de Short Tandem Repeats (STRs) a metodologia de eleição em Genética Forense. A introdução da técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction) revolucionou a área forense, dado que permite a obtenção de inúmeras cópias de ADN, através da amplificação de sequências específicas de interesse. O contínuo desenvolvimento científico e o aparecimento de novas metodologias, compele à atualização dos procedimentos laboratoriais implementados, de forma a rentabilizá-los e torná-los mais eficientes. No entanto, a implementação de uma metodologia, num laboratório acreditado, requer uma validação interna que compreende uma análise extensiva a fim de confirmar a sua adequabilidade. A avaliação direta por comparação com métodos desenvolvidos constitui uma fase crucial deste processo. O kit Investigator® 26plex QS, da QIAGEN, assenta numa reação de PCR multiplex, através da amplificação simultânea de 24 STRs, 2 Sensores de Qualidade e Amelogenina. Os Sensores de Qualidade inclusos neste kit de amplificação permitem inferir sobre a qualidade da amostra e o sucesso da reação de PCR, alertando, igualmente, para a presença de inibidores. Com o objetivo de avaliar o kit Investigator® 26plex QS, nomeadamente por comparação direta com as metodologias já implementadas e validadas no SGBF-C, o GlobalFiler™ PCR Amplification Kit e o PowerPlex® Fusion 6C System, foram selecionadas 24 amostras para amplificação (PE-SGBF-C-001 Rev09, Determinação de perfil genético de ADN por PCR/eletroforese capilar a partir de amostras de referência de sangue e saliva – procedimento interno do SGBF-C). A eletroforese capilar realizou-se no sequenciador automático ABI PRISM® 3500 Genetic Analyzer, seguindo-se a análise dos eletroferogramas através do software GeneMapper™ ID-X 1.6. Neste estudo foi possível constatar que os perfis genéticos obtidos com o kit Investigator® 26plex QS são concordantes com os perfis resultantes da análise através das metodologias supramencionadas. Adicionalmente, os dados preliminares deste trabalho evidenciam o potencial deste kit de amplificação e sugerem tratar-se de uma metodologia robusta de análise. Sendo, não obstante, imprescindível a realização de estudos complementares de validação.
- Análise Retrospectiva dos Arguidos Condenados Inseridos na Base de Dados de Perfis de ADN por ComarcaPublication . Bento, Ana; Bogas, Vanessa; Cardoso, Paula; Real, F. Corte; Brito, PedroIntrodução A Base de Dados de Perfis de ADN portuguesa (BDP-ADN) é constituída maioritariamente por registos de arguidos condenados, os quais resultam de solicitações de colheita efetuadas por vinte e três diferentes Comarcas, áreas geográficas sob a jurisdição de um tribunal. Atualmente, existe a perceção de que as solicitações de colheita e inserção de perfis genéticos recebidas na BDP-ADN não provêm de forma homogénea das diferentes Comarcas, a nível nacional, pelo que se tentou identificar quais as Comarcas que terão contribuído para o maior número de arguidos condenados inseridos na BDP-ADN. Assim, foi efetuado um levantamento de todos os registos de arguidos condenados na BDP-ADN desde a sua criação até 31 de dezembro de 2023, identificando qual a proveniência dos pedidos de inserção. Material e Métodos Com o intuito de concretizar este estudo, foram solicitados os registos de todos os condenados inseridos na BDP-ADN no período acima referido, os quais foram devidamente anonimizados. Posteriormente, com recurso ao software Excel, os dados foram analisados, permitindo a caracterização da população em estudo. Resultados e Discussão Com base nos 16845 registos de condenados analisados, observou-se uma elevada prevalência de pedidos com origem nas Comarcas de Lisboa (3621), Aveiro (1406), Lisboa Oeste (1363), Açores (1266) e Porto (1211) Em contraponto, identificou-se as Comarcas com menos arguidos condenados como sendo Castelo Branco (63), Viana do Castelo (71), Vila Real (86) Madeira (136) e Portalegre (232). A densidade populacional do território afeto a cada Comarca terá, obrigatoriamente, reflexo na taxa de criminalidade e, consequentemente, no número de arguidos condenados inseridos na Base de Dados. Contudo, a elevada prevalência observada nas Comarcas dos Açores e de Aveiro poderá ser também explicada pela existência de procedimentos já bem estabelecidos nas respetivas autoridades judiciárias, no sentido de serem solicitadas as recolhas e inserção na BDP-ADN. Conclusões Este trabalho permitiu identificar as Comarcas com elevado número de pedidos de inserção na Base de Dados de Perfis de ADN e, em contraponto, as com menor representatividade, o que permitirá, no futuro, direcionar ações de sensibilização nestas Comarcas para uma maior adesão.
- In house Real-Time PCR multiplex for simultaneous detection of human influenza A and B virus and respiratory syncytial virusPublication . Fadoni, Jennifer; Cainé, Laura; Rodrigues, Joana; Mofreita, Vânia; Nascimento, Rui; Mukan, Olena; Corte Real, F.; Amorim, António
- Hepatitis A: Ultrasensitive enzyme-linked fluorescence assay in occasional detection of prior contact in a medico-legal sample In LisbonPublication . Mofreita, Vânia; Cainé, Laura; Rodrigues, Joana; Nascimento, Rui; Mukan, Olena; Fadoni, Jennifer; Corte Real, F.; Amorim, António
- Next Generation Sequencing for variant detection of SARS-CoV-2 in a medico-legal context in the second year of the PandemicPublication . Rodrigues, Joana; Cainé, Laura; Mofreita, Vânia; Nascimento, Rui; Mukan, Olena; Fadoni, Jennifer; Corte Real, F.; Amorim, António