Validação da amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler Plus PCR Amplification Kit - resultados preliminares

Dourado, Catarina G.; Lucas, Isabel; Vieira da Silva, Cláudia; Carvalho, Mónica; Amorim, António

http://hdl.handle.net/10400.26/49372

Use this identifier to reference this record.

Name:	Description:	Size:	Format:
Estudo de cabelos - comparação de metodologias de extração de ADN.pdf		1.15 MB	Adobe PDF	Download

Send Feedback

Authors

Dourado, Catarina G.

Lucas, Isabel

Vieira da Silva, Cláudia

Carvalho, Mónica

Amorim, António

Abstract(s)

análise de marcadores genéticos do tipo STR (short tandem repeat) é uma das metodologias mais utilizadas em perícias no âmbito da genética forense. Para além do estudo de marcadores autossómicos, também o estudo de marcadores do cromossoma Y é muito frequente, tendo estes especial importância não só em perícias de agressão sexual, como também em perícias de identificação genética individual e no âmbito da investigação biológica de parentesco. A necessidade de resolver as perícias de forma célere, torna fundamental que os procedimentos laboratoriais sejam otimizados no sentido de se realizarem no menor tempo possível, nunca comprometendo os resultados obtidos. Nesse sentido, os kits comerciais de amplificação de STRs têm sido aperfeiçoados de forma a poderem ser utilizados sem necessidade prévia de uma extração de ADN. Atualmente, o kit Yfiler® Plus é o mais utilizado na obtenção de haplótipos do cromossoma Y no SGBF-S, permitindo a amplificação simultânea de 27 Y-STRs (short tandem repeats do cromossoma Y). Para que uma nova metodologia possa ser aplicada na rotina laboratorial do SGBF-S (Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses), é imperativo proceder à sua validação interna para determinar a sua eficácia e reprodutibilidade, de modo a que possa ser aplicada na casuística forense. O presente trabalho revela os primeiros resultados obtidos no SGBF-S relativamente à amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler® Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems). Foram selecionadas amostras (manchas de sangue) de indivíduos do sexo masculino não relacionados entre si. Estas foram extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems), amplificadas com o kit Yfiler® Plus e posteriormente sujeitas a eletroforese capilar. As mesmas amostras foram amplificadas de forma direta (fazendo um punch de 0.5mm nas amostras), e sujeitas a eletroforese capilar. Ao analisar os resultados obtidos com o software GeneMapper IDX v1.6 (Applied Biosystems), verifica-se a existência de perfis de qualidade e concordantes entre si, independentemente da metodologia utilizada. As alterações à metodologia do fabricante que foram adotadas, não comprometem a obtenção de resultados válidos, demonstrando a robustez do kit Yfiler® Plus. Assim, os resultados preliminares apresentados são muito satisfatórios, pelo que se deverá prosseguir no sentido da validação desta metodologia e a sua implementação no SGBF-S.