A carregar...
53 resultados
Resultados da pesquisa
A mostrar 1 - 10 de 53
- Aplicação do Powerplex Y System no estudo de casos de agressão sexualPublication . Vieira da Silva, Cláudia; Cruz, C.; Ribeiro, Teresa; Lucas, Isabel; Espinheira, R.O cromossoma Y é especificamente masculino, haploide e transmitido de pai para filho sem alterações, a menos que tenham ocorrido mutações A maior vantagem do estudo dos STRs do cromossoma Y, em contraste com os STRs autossómicos é a amplificação selectiva do ADN masculino. Os STRs do cromossoma Y têm propriedades de utilidade forense especialmente quando aplicados em vestígios biológicos provenientes de casos de agressão sexual, em que um suspeito masculino está envolvido, o que acontece praticamente na totalidade dos casos. Diversas metodologias são aplicadas desde há longa data no estudo de vestígios biológicos provenientes de agressões sexuais, como a pesquisa de espermatozóides, a pesquisa de esperma pela reacção de Fosfatase Ácida e o estudo do gene homólogo da Amelogenina Da amplificação desta região dos cromossomas sexuais resultam fragmentos com 106 pb do cromossoma X e 112 pb do cromossoma Y, mas, se o material biológico feminino estiver em muito maior quantidade que o masculino, ao realizar o estudo da Amelogenina pode ser difícil detectar o cromossoma Y. Neste estudo com aplicação do Powerplex® Y System detecta se de forma inequívoca a presença de material genético de origem masculina, obtendo se um perfil genético ou haplotipo que poderá ser comparado com o dos suspeitos. Este kit está comercialmente disponível e validado e permite a amplificação simultânea de 12 Y STRs DYS 19 DYS 385 a/b, DYS 389 I, DYS 389 II, DYS 390 DYS 391 DYS 392 DYS 393 DYS 437 DYS 438 DYS 439.Nos casos de agressão sexual, o ADN autossómico do agressor pode surgir mascarado com o da vítima conduzindo a uma “sobrerepresentação”do perfil genético da mesma Q uando os vestígios biológicos do agressor estão presentes em muito pequena quantidade e os resultados da fosfatase ácida para pesquisa de esperma são negativos, a pesquisa de Y STRs pode ser um complemento fundamental para a prova de que existe nas amostras estudadas material genético de origem masculina . A pesquisa de Amelogenina pode não ser a forma mais eficiente de comprovar a presença de material biológico masculino Nos casos em que a presença de material biológico masculino é escasso comparativamente ao da vítima (figura 2 ou quando ocorre delecção no gene da Amelogenina do cromossoma Y do agressor, este pode não ser detectado na análise de fragmentos, Nos casos em que se pode comparar o perfil genético das amostras com o perfil do suspeito, o estudo dos STRs autossómicos pode ser difícil de interpretar numa mistura de material biológico, sobretudo se estiver envolvido mais do que um suspeito O estudo dos Y STRs nestas amostras permite excluir imediatamente o(s) suspeito(s) se o perfil genético ou haplótipo não for coincidente. Se ocorrer coincidência dos resultados os restantes membros da mesma linha paterna não podem ser excluídos .Quando a vítima é um indivíduo do sexo masculino os resultados obtidos também são válidos, sendo possível identificar o perfil genético do agressor conhecendo o perfil genético da vítima, desde que não pertençam à mesma linha paterna.O Kit Powerplex®Y system poderá ser uma ferramenta muito útil para detectar quantidades mínimas de ADN masculino nas amostras recomendando se a sua utilização nos casos de agressão.
- Contribuição do Y-DNA na identificação de agressoresPublication . Vieira da Silva, Cláudia; Dario, Paulo; Ribeiro, Teresa; Lucas, Isabel; Cruz, C.; Espinheira, R.Os loci do cromossoma Y (Y-STRs) têm sido extensivamente investigados em ciências forenses para identificação de indivíduos do sexo masculino. A aplicação dos Y-STRs, simplifica a análise de misturas, por apenas permitir a amplificação do material genético masculino do s vestígios biológicos. “Y-STR testing” tem sido considerada uma ferramenta adicional valiosa em casos que envolvem misturas de grandes quantidades de DNA feminino com pequenas quantidades de DNA masculino ou/e em casos de múltiplos dadores de sémen. A aplicação dos Y-STRs em análises de misturas evita a necessidade de realizar uma extracção diferencial de esperma e de células epiteliais. Estes procedimentos de extracção têm um valor limitado em amostras com contribuições masculino/feminino desbalanceadas ou em restos de fluidos biológicos sem espermatozóides.Apesar do baixo poder de discriminação dos Y-STRs e de todos os indivíduos da mesma linha paterna, neste estudo ficou demonstrado que em casos forenses a análise dos Y-STRs é indispensável devido à especificidade de amplificação genética da componente masculina de uma amostra biológica. Em alguns casos em que a quantidade de material masculino é insuficiente para ser detectado um perfil completo com os sistemas do haplotipo mínimo (9 loci), mesmo não sendo estes sistemas suficientes para afirmar que a amostra do suspeito coincide com a da vítima poderemos afirmar que um indivíduo pode ser excluído de ser contribuinte de algum vestígio biológico, se não existir existir coincidência entre alguma das características genéticas do suspeito e as características genéticas dos vestígios encontrados. Os resultados obtidos demonstram que todas as amostras dos casos de violação devem ser estudados com sistemas multiplex de grande sensibilidade de Y-STRs. A presença de Y-DNA constitui prova de contacto sexual sendo importante para corroborar o testemunho das vítimas de abuso sexual.
- Identificação Genética de Amostras Utilizadas na Determinação da Taxa de AlcoolemiaPublication . Cruz, C.; Vieira da Silva, Cláudia; Ribeiro, Teresa; Lucas, Isabel; Espinheira, RosaA condução sob influência de álcool é responsável por grande parte da sinistralidade rodoviária e a sua fiscalização tem constituído uma das medidas de prevenção dessa sinistralidade. A determinação da Taxa de Alcoolémia no Sangue (TAS) é um dos meios utilizados na fiscalização. No Serviço de Genética e Biologia Forense da Delegação de Lisboa ocorreram solicitações de identificação genética de amostras previamente utilizadas na determinação de TAS.A identificação genética consiste no estudo do perfil de ADN obtido a partir das referidas amostras e na posterior comparação com o perfil de ADN obtido a partir de amostras biológicas de referência, colhidas ao indivíduo sujeito a pesquisa de álcool ou, no caso de falecimento deste, com o perfil genético de familiares directos. Este trabalho descreve os procedimentos realizados na identificação genética das referidas amostras. A comparação dos perfis genéticos obtidos permitiu detectar coincidência/não coincidência ou presença/ausência de uma relação de parentesco entre os referidos perfis e, consequentemente, determinar a identidade da amostra.Este tipo de estudo pode constituir um importante complemento às provas estabelecidas para a detecção do estado de influenciado pelo álcool ou por substâncias estupefacientes ou psicotrópicas.
- Influência do tipo de zaragatoa bucal na obtenção de perfis genéticosPublication . Dario, Ana Rita; Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Marcelino, Miguel; Vieira da Silva, Cláudia; Amorim, AntónioNo âmbito das investigações biológicas forenses é necessário utilizar amostras de referência, geralmente sangue ou saliva. Estas amostras, se colhidas corretamente e armazenadas em condições adequadas, não apresentam problemas de escassez de material genético e mantêm-se estáveis, por um longo período de tempo. Atualmente, no SGBF-S são preferencialmente colhidas, apenas, duas zaragatoas bucais, a cada interveniente, sendo por isso, de extrema importância, a utilização do tipo de zaragatoas mais adequado para este tipo de colheita, visto que não existirá, como alternativa, o suporte de mancha de sangue. Assim, para além de outros fatores, nomeadamente o correto acondicionamento e preservação das amostras colhidas, existe um de grande importância a considerar - o tipo de suporte - uma vez que pode condicionar a quantidade de ADN presente na amostra. O presente trabalho pretende identificar se a ausência da obtenção de um perfil genético completo está relacionada com o tipo de zaragatoa usada na colheita da amostra. Foram analisadas amostras extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems™), amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification (Applied Biosystems™). ™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). Nos casos em que não foi obtido um perfil completo, repetiu-se a extração com um kit mais sensível e eficaz – PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction (Applied Biosystems™), e posteriormente a quantificação com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) desta nova extração, como da anterior. Apesar da grande eficácia e sensibilidade desta metodologia de extração, nem sempre foi possível obter um perfil genético valorizável. Para a resolução de algumas perícias, foi possível recorrer à amostra complementar (mancha de sangue) e realizar os procedimentos laboratoriais adequados. Noutras situações, foi mesmo necessário proceder a nova colheita. Na casuística do Laboratório, verificou-se que a ausência de perfis genéticos ou presença de perfis não valorizáveis ou incompletos está, frequentemente, relacionada com o tipo de zaragatoa utilizada na colheita de células do epitélio bucal. Assim, concluiu-se que o tipo de zaragatoa dentada, de extremidade descartável, conduz regularmente à obtenção de um perfil genético robusto. Após o estudo efetuado, recomenda-se o uso de zaragatoas dentadas com extremidade descartável, em detrimento de outros tipos de zaragatoas bucais.
- Estudo de cabelos comparação de metodologias de extração de ADNPublication . Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Olivera, Ana Rita; Vieira da Silva, CláudiaEm investigações biológicas forenses, sobretudo em perícias de âmbito criminal, surgem por vezes amostras de cabelos que requerem identificação genética.Deste modo, é de especial importância que sejam implementadas metodologias que permitam a obtenção de uma concentração de ADN suficiente e de boa qualidade para se conseguir como resultado final um perfil genético robusto e valorizável. Tendo o SGBF-S o objetivo de acreditar os ensaios em amostras forenses, particularmente as amostras de cabelos, foi elaborado um estudo para validar a metodologia de extração de ADN mais adequada para este tipo de amostra. Para atingir o objetivo deste trabalho, foram colhidos 4 a 6 cabelos a cada um de 10 colaboradores do Serviço, cujos perfis genéticos estavam previamente determinados. Foram utilizados 2 a 3 cabelos de cada colaborador para extração com cada um dos diferentes kits amplamente utilizados no Serviço em amostras problema - PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™) e PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™). As amostras extraídas foram quantificadas com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) e amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification Kit (Applied Biosystems™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). A análise dos resultados obtidos permite verificar que as amostras extraídas com PrepFiler Express™ apresentam concentrações significativamente mais elevadas de ADN total, comparativamente às amostras extraídas com PrepFiler™ BTA. Foram obtidos perfis genéticos completos para todas as amostras extraídas com PrepFiler Express™. No caso das amostras extraídas com PrepFiler™ BTA, apenas foram obtidos perfis genéticos completos para 8 das 10 amostras. Não foi possível obter qualquer perfil a partir das duas restantes amostras. Assim, pelo presente estudo podemos concluir que a metodologia de extração de ADN com PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit é mais adequada do que a metodologia de Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses 2 / 2 extração com PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit, para a obtenção de ADN a partir de amostras de cabelos.
- Vestígios Biológicos na Pele da VítimaPublication . Cruz, C.; Lucas, Isabel; Vieira da Silva, Cláudia; Dario, Paulo; Ribeiro, Teresa; Espinheira, RosaO estudo de DNA, em crimes de agressão/abuso sexual, constitui uma ferramenta de extrema importância para identificar o agressor. Os critérios utilizados na colheita dos vestígios biológicos, a partir do corpo da vítima, podem influenciar a obtenção de resultados laboratoriais que permitam o esclarecimento dos factos ocorridos. Os erros involuntariamente cometidos podem conduzir a uma perda irremediável das evidências. Durante o exame clínico efectuado às vítimas, são habitualmente colhidas amostras de diferente natureza, tais como: esxudado vaginal, anal e bucal (em zaragatoa ou lâmina); papel e pensos higiénicos; peças de roupa.Pretende-se, com este trabalho, realçar a utilidade da recolha de vestígios biológicos a partir da superfície da pele das vítimas de abuso sexual para a resolução deste tipo de casos, uma vez que podem constituir um importante meio de prova.A presença de sémen e/ou espermatozóides em amostras forenses tem sido considerada a evidência necessária para provar a existência de contacto sexual. Relativamente ao Caso 1, a observação microscópica das lâminas de esfregaço de “lavado” da mama não revelou presença de espermatozóides. No entanto, o estudo de Y-STRs a partir da zaragatoa de “lavado” da mama permitiu a detecção de um perfil genético, o que constitui um indício de contacto físico entre a vítima e o agressor. É de salientar ainda o facto de, neste caso, a referida zaragatoa ter sido a única amostra que apresentou vestígios biológicos masculinos, o que demonstra a importância da colheita de vestígios biológicos a partir da superfície da pele das vítimas de abuso sexual para a resolução deste tipo de casos, podendo constituir um importante meio de prova.
- Validação da amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler Plus PCR Amplification Kit - resultados preliminaresPublication . Dourado, Catarina G.; Lucas, Isabel; Vieira da Silva, Cláudia; Carvalho, Mónica; Amorim, Antónioanálise de marcadores genéticos do tipo STR (short tandem repeat) é uma das metodologias mais utilizadas em perícias no âmbito da genética forense. Para além do estudo de marcadores autossómicos, também o estudo de marcadores do cromossoma Y é muito frequente, tendo estes especial importância não só em perícias de agressão sexual, como também em perícias de identificação genética individual e no âmbito da investigação biológica de parentesco. A necessidade de resolver as perícias de forma célere, torna fundamental que os procedimentos laboratoriais sejam otimizados no sentido de se realizarem no menor tempo possível, nunca comprometendo os resultados obtidos. Nesse sentido, os kits comerciais de amplificação de STRs têm sido aperfeiçoados de forma a poderem ser utilizados sem necessidade prévia de uma extração de ADN. Atualmente, o kit Yfiler® Plus é o mais utilizado na obtenção de haplótipos do cromossoma Y no SGBF-S, permitindo a amplificação simultânea de 27 Y-STRs (short tandem repeats do cromossoma Y). Para que uma nova metodologia possa ser aplicada na rotina laboratorial do SGBF-S (Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses), é imperativo proceder à sua validação interna para determinar a sua eficácia e reprodutibilidade, de modo a que possa ser aplicada na casuística forense. O presente trabalho revela os primeiros resultados obtidos no SGBF-S relativamente à amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler® Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems). Foram selecionadas amostras (manchas de sangue) de indivíduos do sexo masculino não relacionados entre si. Estas foram extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems), amplificadas com o kit Yfiler® Plus e posteriormente sujeitas a eletroforese capilar. As mesmas amostras foram amplificadas de forma direta (fazendo um punch de 0.5mm nas amostras), e sujeitas a eletroforese capilar. Ao analisar os resultados obtidos com o software GeneMapper IDX v1.6 (Applied Biosystems), verifica-se a existência de perfis de qualidade e concordantes entre si, independentemente da metodologia utilizada. As alterações à metodologia do fabricante que foram adotadas, não comprometem a obtenção de resultados válidos, demonstrando a robustez do kit Yfiler® Plus. Assim, os resultados preliminares apresentados são muito satisfatórios, pelo que se deverá prosseguir no sentido da validação desta metodologia e a sua implementação no SGBF-S.
- Aplicación de la norma de acreditación ISO 17025 en un laboratorio de genética y biología forensesPublication . Vieira da Silva, CláudiaLa Organización Internacional de Normalización, comúnmente conocida como ISO, es una federación de organismos nacionales de normalización de 110 países de todo el mundo con la misión de promover el desarrollo de la normalización y facilitar el intercambio internacional de bienes y servicios. Las normas ISO son elaboradas por comités internacionales que a su vez cuentan con el apoyo de muchos comités técnicos de los países miembros de ISO. La norma ISO/IEC 17025 aceptado en todo el mundo, es el documento principal que comprende los requisitos generales para reconocer la competencia técnica, así como la gestión de la calidad de los laboratorios de prueba y análisis forense. Algunos de los beneficios de su implementación incluyen una mayor confianza del personal en su trabajo y la acreditación mediante un escrutinio calificado por un tercero externo creíble, contribuyendo a una mayor seguridad y credibilidad para todos los que se benefician de estos resultados. En los laboratorios de genética y biología forense, dado que trabajan con procesos sensibles, es fundamental implantar un sistema de calidad que garantice la calidad e imparcialidad de los resultados. Este sistema de calidad debe incluir, no sólo la determinación de los perfiles genéticos, sino también las pruebas necesarias para determinar la naturaleza de las muestras biológicas. En el laboratorio de Genética y Biología Forense de Lisboa, la validación consiste en demostrar, a través de pruebas objetivas, que es adecuado para la finalidad prevista. Este laboratorio valida métodos no normalizados para confirmar su idoneidad. Debido a las diferencias entre los distintos métodos de ensayo, los parámetros a validar dependen de las características del ensayo, y no se propone una única forma de validación. El objetivo de esta presentación, es exponer las metodologías implementadas en este laboratorio para la validación y acreditación de pruebas de orientación y certeza, que permitan determinar la naturaleza de las muestras biológicas estudiadas en casos criminales.
- Valoración estadística de las pruebas en genética forensePublication . Vieira da Silva, CláudiaLa genética forense consiste en la aplicación del análisis genético de la diversidad humana para la resolución de ciertos problemas judiciales, mediante la capacidad de relacionar a una persona con un caso concreto, ya sea de derecho civil o penal. Son dos los tipos de pericias más comunes en los laboratorios de Genética Forense: La investigación biológica de Paternidad y la Criminalística Biológica. En las investigaciones de paternidad, el ejemplo más simple y común es si un hombre es el padre biológico de un niño, e implica pruebas de ADN de la madre, el niño y el presunto padre juntos. En los últimos años, se ha producido un aumento de las solicitudes para determinar la filiación utilizando diferentes miembros de la familia, lo que siempre requiere una evaluación estadística de estas pruebas. En estos casos, la fuerza de la evidencia de los datos de ADN (LR- Likelihood Ratio) a menudo puede ser mucho más débil que en los casos de paternidad de trío y no proporciona evidencia sólida a favor o en contra de la paternidad. Actualmente, los mayores desafíos son los cálculos complejos, en los que los perfiles genéticos autosómicos STRS no son suficientes y se requiere más información, incluso con X-STRs, Y-STRs, o incluso más marcadores genéticos. En los casos criminales, el perfil genético obtenido a partir de las muestras problema se compara con el perfil genético de víctimas y sospechosos. En estos casos, la valoración estadística mediante el cálculo de LR (Likelihood Ratio) en cuenta el número de posibles contribuyentes a un perfil genético determinado. El objetivo de esta presentación es exponer, analizar y aplicar la razón bayesiana de probabilidad para estimar el valor de las pruebas de ADN en algunos casos complejos de paternidad y criminales.
- Amostras biológicas alternativas em processos de Investigação de Parentesco- A propósito de um casoPublication . Vieira da Silva, Cláudia; Serrano, Filipa; Fernandes, Carla; Amorim, AntónioNo âmbito das investigações biológicas de parentesco, perícias forenses mais requisitadas no Serviço de Genética em Biologia Forenses, são, em geral, estudadas amostras de referência cujas metodologias são de fácil implementação e estão perfeitamente descritas e validadas. No entanto, por vezes surgem processos, que necessitam do estudo de amostras complexas que necessitam de metodologias mais complexas de forma a obter perfis genéticos que respeitam os critérios de qualidade existentes no SGBF-S. O desenvolvimento de metodologias em biologia molecular e a sua implementação laboratorial, tem contribuído para a obtenção de resultados robustos a partir de amostras desafiantes. No âmbito deste trabalho, refere-se um caso de investigação de parentesco, requisitado pelo ministério público que no âmbito de uma averiguação oficiosa de paternidade, solicitou ao SGBF-Sul, a realização dos respetivos exames genéticos ao Pretenso Pai, Mãe e Filha falecida, cujas amostras disponíveis eram blocos de parafina com tecidos biológicos inclusos, preservados na maternidade onde decorreu o óbito.