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- Imigração em Portugal: contributo dos polimorfismos genéticos para a investigação de parentesco entre supostos familiaresPublication . Carvalho, Mónica; Vieira Da Silva, Cláudia; Dourado, Catarina; Dario, Paulo; Reis, Fátima; Rodrigues, Diogo; Porto, Maria João; Ribeiro, TeresaA solicitação de investigações de parentesco inseridas em processos de imigração, nomeadamente os relacionados com indivíduos que pretendem obter títulos de residência em Portugal, têm vindo a aumentar nos últimos anos no Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul (SGBF S) O problema levanta se quando existe um familiar que já reside em Portugal, o qual pretende que outros familiares venham a residir também em Portugal e são apresentados documentos cuja veracidade é posta em causa Neste trabalho, apresentamos um caso em que o Ministério Público pretende confirmar a relação de parentesco biológico existente entre um determinado indivíduo e os seus três filhos registrais do sexo masculino,sendo que apenas dois deles são filhos da mesma mulher
- Variabilidade da quantidade de ADN em zaragatoas bucais –estudo preliminarPublication . Lucas, Isabel; Oliveira, Rita; Dourado, Catarina; Dario, Paulo; Reis, R.; Vieira Da Silva, Cláudia; Amorim, António; Afonso Costa, Heloísa; Simão, F.; Ribeiro, Teresa; Porto, Maria João; Costa Santos, JorgeOs laboratórios de Genética Forense têm como objetivo a obtenção de perfis genéticos com vista à identificação humana, para a resolução de perícias do âmbito cível e criminal. Com vista à obtenção dos perfis genéticos dos indivíduos, é necessário efetuar colheitas de amostras biológicas dos mesmos, denominadas por amostras de referência. As mais comummente usadas são as obtidas por descamação do epitélio da mucosa bucal, com recurso ao uso de zaragatoas bucais. A variabilidade da quantidade de células colhidas através deste procedimento, pode ser originada por diversos fatores. O objetivo deste estudo é avaliar fatores que eventualmente possam contribuir para tal facto.
- Estudo das frequências alélicas de Short Tandem Repeats (STRs) autossómicos na população de MoçambiquePublication . Victorino, José; Brito, Denise R.A.; Macucule, Paula A.; Dourado, Catarina; Lucas, Isabel; Ribeiro, Teresa; Porto, Maria João; Ribeiro, Ana; Mussá, Tufária; Carvalho, MónicaOs marcadores genéticos Short Tandem Repeats (STRs) são sequências nucleótidicas altamente polimórficas e repetitivas, encontradas no ácido desoxirribonucleico (ADN), que devido à sua elevada variabilidade e ao facto de serem facilmente amplificados por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), têm sido utilizadas com diferentes fins, nomeadamente, em estudos de genética populacional e de identificação humana. A identificação humana utilizando o ADN é um grande desafio para Moçambique, uma vez que não existem bases de dados genéticos populacionais. Assim, o objetivo deste estudo consiste na contribuição genética para estas bases de dados através da tipagem de 21 loci de STRs autossómicos em dadores dos bancos de sangue de Moçambique.
- Influência do tipo de zaragatoa bucal na obtenção de perfis genéticosPublication . Dario, Ana Rita; Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Marcelino, Miguel; Vieira da Silva, Cláudia; Amorim, AntónioNo âmbito das investigações biológicas forenses é necessário utilizar amostras de referência, geralmente sangue ou saliva. Estas amostras, se colhidas corretamente e armazenadas em condições adequadas, não apresentam problemas de escassez de material genético e mantêm-se estáveis, por um longo período de tempo. Atualmente, no SGBF-S são preferencialmente colhidas, apenas, duas zaragatoas bucais, a cada interveniente, sendo por isso, de extrema importância, a utilização do tipo de zaragatoas mais adequado para este tipo de colheita, visto que não existirá, como alternativa, o suporte de mancha de sangue. Assim, para além de outros fatores, nomeadamente o correto acondicionamento e preservação das amostras colhidas, existe um de grande importância a considerar - o tipo de suporte - uma vez que pode condicionar a quantidade de ADN presente na amostra. O presente trabalho pretende identificar se a ausência da obtenção de um perfil genético completo está relacionada com o tipo de zaragatoa usada na colheita da amostra. Foram analisadas amostras extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems™), amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification (Applied Biosystems™). ™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). Nos casos em que não foi obtido um perfil completo, repetiu-se a extração com um kit mais sensível e eficaz – PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction (Applied Biosystems™), e posteriormente a quantificação com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) desta nova extração, como da anterior. Apesar da grande eficácia e sensibilidade desta metodologia de extração, nem sempre foi possível obter um perfil genético valorizável. Para a resolução de algumas perícias, foi possível recorrer à amostra complementar (mancha de sangue) e realizar os procedimentos laboratoriais adequados. Noutras situações, foi mesmo necessário proceder a nova colheita. Na casuística do Laboratório, verificou-se que a ausência de perfis genéticos ou presença de perfis não valorizáveis ou incompletos está, frequentemente, relacionada com o tipo de zaragatoa utilizada na colheita de células do epitélio bucal. Assim, concluiu-se que o tipo de zaragatoa dentada, de extremidade descartável, conduz regularmente à obtenção de um perfil genético robusto. Após o estudo efetuado, recomenda-se o uso de zaragatoas dentadas com extremidade descartável, em detrimento de outros tipos de zaragatoas bucais.
- Estudo de cabelos comparação de metodologias de extração de ADNPublication . Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Olivera, Ana Rita; Vieira da Silva, CláudiaEm investigações biológicas forenses, sobretudo em perícias de âmbito criminal, surgem por vezes amostras de cabelos que requerem identificação genética.Deste modo, é de especial importância que sejam implementadas metodologias que permitam a obtenção de uma concentração de ADN suficiente e de boa qualidade para se conseguir como resultado final um perfil genético robusto e valorizável. Tendo o SGBF-S o objetivo de acreditar os ensaios em amostras forenses, particularmente as amostras de cabelos, foi elaborado um estudo para validar a metodologia de extração de ADN mais adequada para este tipo de amostra. Para atingir o objetivo deste trabalho, foram colhidos 4 a 6 cabelos a cada um de 10 colaboradores do Serviço, cujos perfis genéticos estavam previamente determinados. Foram utilizados 2 a 3 cabelos de cada colaborador para extração com cada um dos diferentes kits amplamente utilizados no Serviço em amostras problema - PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™) e PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™). As amostras extraídas foram quantificadas com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) e amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification Kit (Applied Biosystems™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). A análise dos resultados obtidos permite verificar que as amostras extraídas com PrepFiler Express™ apresentam concentrações significativamente mais elevadas de ADN total, comparativamente às amostras extraídas com PrepFiler™ BTA. Foram obtidos perfis genéticos completos para todas as amostras extraídas com PrepFiler Express™. No caso das amostras extraídas com PrepFiler™ BTA, apenas foram obtidos perfis genéticos completos para 8 das 10 amostras. Não foi possível obter qualquer perfil a partir das duas restantes amostras. Assim, pelo presente estudo podemos concluir que a metodologia de extração de ADN com PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit é mais adequada do que a metodologia de Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses 2 / 2 extração com PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit, para a obtenção de ADN a partir de amostras de cabelos.
- Validação da amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler Plus PCR Amplification Kit - resultados preliminaresPublication . Dourado, Catarina G.; Lucas, Isabel; Vieira da Silva, Cláudia; Carvalho, Mónica; Amorim, Antónioanálise de marcadores genéticos do tipo STR (short tandem repeat) é uma das metodologias mais utilizadas em perícias no âmbito da genética forense. Para além do estudo de marcadores autossómicos, também o estudo de marcadores do cromossoma Y é muito frequente, tendo estes especial importância não só em perícias de agressão sexual, como também em perícias de identificação genética individual e no âmbito da investigação biológica de parentesco. A necessidade de resolver as perícias de forma célere, torna fundamental que os procedimentos laboratoriais sejam otimizados no sentido de se realizarem no menor tempo possível, nunca comprometendo os resultados obtidos. Nesse sentido, os kits comerciais de amplificação de STRs têm sido aperfeiçoados de forma a poderem ser utilizados sem necessidade prévia de uma extração de ADN. Atualmente, o kit Yfiler® Plus é o mais utilizado na obtenção de haplótipos do cromossoma Y no SGBF-S, permitindo a amplificação simultânea de 27 Y-STRs (short tandem repeats do cromossoma Y). Para que uma nova metodologia possa ser aplicada na rotina laboratorial do SGBF-S (Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses), é imperativo proceder à sua validação interna para determinar a sua eficácia e reprodutibilidade, de modo a que possa ser aplicada na casuística forense. O presente trabalho revela os primeiros resultados obtidos no SGBF-S relativamente à amplificação direta de manchas de sangue com Yfiler® Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems). Foram selecionadas amostras (manchas de sangue) de indivíduos do sexo masculino não relacionados entre si. Estas foram extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems), amplificadas com o kit Yfiler® Plus e posteriormente sujeitas a eletroforese capilar. As mesmas amostras foram amplificadas de forma direta (fazendo um punch de 0.5mm nas amostras), e sujeitas a eletroforese capilar. Ao analisar os resultados obtidos com o software GeneMapper IDX v1.6 (Applied Biosystems), verifica-se a existência de perfis de qualidade e concordantes entre si, independentemente da metodologia utilizada. As alterações à metodologia do fabricante que foram adotadas, não comprometem a obtenção de resultados válidos, demonstrando a robustez do kit Yfiler® Plus. Assim, os resultados preliminares apresentados são muito satisfatórios, pelo que se deverá prosseguir no sentido da validação desta metodologia e a sua implementação no SGBF-S.
- Estudo da correlação entre a presença de sémen e de ADN masculino em amostras forenses de casos de agressão sexualPublication . Pimentel, Mariana; Dourado, Catarina; Lucas, Isabel; Amorim, António; Vieira da Silva, CláudiaNos casos de investigação criminal que envolvem agressão sexual, a abordagem laboratorial tem como objetivo a determinação da existência de fluídos corporais, nomeadamente sémen, e a respetiva identificação genética, que por análise comparativa contribui para a identificação do contribuinte para determinado vestígio. O sémen é um dos vestígios biológicos com maior predominância nos processos de agressão sexual, pelo que a sua deteção tem particular importância. Este fluído biológico contém uma glicoproteína designada por PSA (Antigénio Prostático Específico), que contribui para a liquefação do sémen, facilitando a mobilidade dos espermatozoides. A identificação positiva de sémen pode ser extremamente importante para suportar a alegação de um crime de abuso sexual, pelo que testes de orientação e de certeza são pertinentes para a identificação deste fluido biológico. No SGBF-S, a presença de sémen é detetada através do teste SERATEC® PSA semiquant test (SERATEC®), que deteta a presença da PSA através de dois anticorpos monoclonais. Deste método resulta uma reação colorimétrica, cujos resultados são classificados internamente com base na intensidade da banda teste, em comparação com o controlo positivo interno. A determinação da presença de sémen é efetuada em paralelo com a extração e quantificação de ADN, com o objetivo de tomar decisões relativamente aos marcadores genéticos a amplificar. Este trabalho tem como objetivo determinar a relação entre a presença de sémen e a concentração de ADN masculino presente na amostra biológica. Foi recolhida a informação de 100 processos estudados no SGBF-S, num total de 380 amostras analisadas. Foram comparados os resultados das provas de orientação com os resultados de quantificação para ADN masculino. A extração de ADN foi efetuada pelo método PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™) num AutoMate Express Forensic DNA Extraction System e a quantificação pelo método de Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) num equipamento 7500 Real-Time PCR System. Os resultados das provas de orientação foram convertidos numa escala de 1 (negativo) a 5 (positivo intenso), Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses 2 / 2 de acordo com a intensidade obtida. A análise descritiva efetuada no Excel, permitiu verificar que foram obtidos resultados de concentração de ADN masculino nulos ou muito próximos de nulo, independentemente da intensidade da reação colorimétrica do Seratec. Paralelamente verificamos valores até 0.4221 ng/μL em amostras com reação negativa para a pesquisa de sémen. Estes resultados parecem indicar que a presença de ADN masculino pode ter outra origem distinta da presença de sémen. Não obstante, tal como esperado, observa-se que, tendencialmente, a presença de ADN masculino parece estar correlacionada com a intensidade da reação de pesquisa de sémen pelo método descrito.