Desenvolvimento e validação de um método analítico para a determinação de canabinóides em amostras de fluido oral por LC-MS/MS

Antunes, Mónica; Simões, Susana; Fonseca, Suzana; Franco, João; Gallardo, Eugenia; Barroso, Mário

http://hdl.handle.net/10400.26/49322

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DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE UM MÉTODO ANALÍTICO PARA A DETERMINAÇÃO DE CANABINÓIDES EM AMOSTRAS DE FLUIDO ORAL POR LC-MS_MS_Antunes_INMLCF.pdf		87.75 KB	Adobe PDF	Download

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A canábis é a droga de abuso mais consumida na Europa, pelo que várias metodologias analíticas têm sido desenvolvidas para a quantificação dos seus componentes em matrizes biológicas, especialmente sangue e urina. No entanto, cada vez mais se está a reconhecer a importância do estudo de matrizes biológicas não-convencionais, nomeadamente cabelo e fluido oral (ou saliva) – os seus procedimentos de recolha não são invasivos e estas amostras fornecem informações complementares sobre o uso de drogas, permitindo o controlo da exposição recente (saliva) e de médio a longo prazo (cabelo). Desta forma, foi desenvolvida uma metodologia analítica para a determinação e quantificação de tetrahidrocanabinol (THC), 11-hidroxi-tetrahidrocanabinol (THC-OH), 11-carboxitetrahidrocanabinol (THC-COOH), canabinol (CBN) e canabidiol (CBD) em amostras de saliva por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS). Segundo as Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs, o cut-off de THC em amostras de saliva é 2 ng/mL, exigindo um procedimento de extração otimizado e a utilização de uma técnica cromatográfica sensível. Resumidamente, a 200 μL de saliva foi adicionado o padrão interno, e as amostras foram submetidas a precipitação proteica com uma mistura de metanol/acetonitrilo (80:20, v/v) refrigerada. Depois de centrifugados, os extratos foram evaporados até à secura, reconstituídos em metanol, e 5 μL foram injetados no equipamento UPLC-QTRAP-MS 6500+ (SCIEX®), numa corrida de 14 minutos. A análise foi efetuada em modo MRM com duas transições para cada composto e uma transição para cada padrão interno. Os métodos foram validados de acordo com as diretrizes da norma ANSI/ASB 036, tendo sido estudados os parâmetros supressão iónica, interferentes, linearidade, precisão e exatidão, carryover, limites de deteção e quantificação, efeito de diluição e estabilidade das amostras extraídas. Todos os estudos destes parâmetros apresentaram resultados satisfatórios, e o método foi aplicado com sucesso a amostras reais. O método desenvolvido mostrou-se fácil, rápido, eficaz e robusto, estando apto para ser utilizado na rotina do laboratório, e sendo uma ferramenta complementar útil para o estudo do consumo recente de canabinóides.