A implementação de um sistema de PCR em multiplex na identificação de amostras forenses em diferentes substratos - kit Investigator 26Plex QS

Cardoso, Paula; Serra, Armando; Bogas, Vanessa; Balsa, Filipa; Lopes, Virgínia; Porto, Maria João; Amorim, António; Corte Real, F.; Brito, Pedro

http://hdl.handle.net/10400.26/47283

Use this identifier to reference this record.

Name:	Description:	Size:	Format:
Congresso 2023_Paula Cardoso.pdf	Comunicação apresentada no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego, 2023	3.38 MB	Adobe PDF	Download

Send Feedback

Authors

Abstract(s)

A individualidade humana concede a cada individuo uma personalidade jurídica e uma identidade pessoal. Esta unicidade possibilita a identificação humana que constitui-se como o alicerce da Genética e Biologia Forenses, que compreende o estudo e caracterização de marcadores polimórficos de ADN (Ácido Desoxirribonucleico), designados Short Tandem Repeats (STRs). Dado que a perícia produzida por esta área científica apresenta um elevado poder probatório, impõem-se uma atualização dos procedimentos implementados, visando incrementar a confiabilidade dos resultados obtidos. O presente projeto teve como propósito avaliar a adequabilidade do kit Investigator® 26Plex QS, Qiagen, à casuística do laboratório Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Centro do INMLCF, I.P., por meio de uma validação interna extensiva que visou a sua posterior implementação. Com este trabalho pretendeu-se relatar os procedimentos e parâmetros utilizados no decurso da validação interna deste ensaio, que encalçaram diretrizes internacionais da SWGDAM, assim como expender os resultados obtidos. Primeiramente, houve a necessidade de fixar critérios únicos de análise que permitissem validar e interpretar os perfis genéticos obtidos nos ensaios subsequentes. De seguida, pretendeu-se aferir o desempenho do kit, verificando a sua concordância com metodologias normalizadas no SGBF-C e avaliando a sua sensibilidade, especificidade, robustez e precisão. Complementarmente, foram efetuadas alterações ao protocolo original, nomeadamente redução de volume e amplificação direta, com vista a obter uma metodologia protocolar otimizada à rotina laboratorial. Este estudo compreendeu a análise de amostras biológicas provenientes de variados substratos, incidindo-se o estudo sobre amostras problema, de referência e amostras simuladas. O procedimento geral incluiu a extração de ADN, seguindose a sua quantificação, quando necessária, e, posterior amplificação pelo kit Investigator® 26plex QS. A eletroforese capilar realizou-se no sequenciador automático Applied Biosystems™ 3500 Genetic Analyzer, sendo a análise dos eletroferogramas efetuada no software GeneMapper™ ID-X 1.6.. Com este trabalho foi possível caracterizar as principais vantagens do kit Investigator® 26plex QS, assim como as suas limitações. Demonstrando-se que este kit de amplificação de ADN humano evidencia elevada robustez, confiabilidade, especificidade e sensibilidade, que permite a obtenção de um perfil genético completo com apenas 15 células humanas (1 ng de ADN).