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- Implementação do sistema de monitorização de temperaturas VIGIE no INMLCFPublication . Sousa, Lara; Melo, Paula; Costa, Pedro; Santos, AgostinhoA cadeia de frio tem início no momento da colheita da amostra, passando pelo transporte e armazenamento, e encerra-se quando a amostra é destruída. Este ciclo necessita de manutenção e monitorização constante, de modo a que se preserve a qualidade dos produtos dos vários serviços de acordo com requisitos de estabilidade de temperatura. É neste contexto que surge o sistema de monitorização de temperaturas da VIGIE . O sistema VIGIE consiste numa plataforma online que reúne os dados obtidos (em tempo real) de todos os sensores integrados em equipamentos de frio. Após parametrização do intervalo de temperaturas de cada sensor, o sistema gera alarmes quando esta se encontra fora do intervalo definido, constituindo esta funcionalidade a grande mais valia de todo sistema. Este trabalho terá como objetivo fazer o ponto de situação da evolução da implementação do sistema VIGIE nas delegações e gabinetes médico-legais (GML) do INMLCF, definir as etapas seguintes para concluir a instalação do mesmo e colocá-lo em pleno funcionamento em todos os serviços do INMLCF. A Delegação do Norte (DN) e os respetivos GML são os serviços do INMLCF onde a instalação está mais avançada, apesar de ainda não se encontrar concluída. Na DN, a instalação encontra-se finalizada e nos GML do Norte já ocorreu a colocação dos sensores e recetores em 8 dos mesmos, com exceção do GML do Cávado. Apesar de estarem instalados na maioria dos GML do Norte, estes ainda não funcionam em pleno, devido a problemas de configuração na alarmística, que gera “falsos alarmes”, e leva à desvalorização dos mesmos. No caso do GML do Alto Douro e Trás-os-Montes, não existe comunicação do recetor, o que leva a crer que se tratem de problemas ao nível das permissões do IGFEJ. A Delegação do Centro e do Sul encontram-se com a instalação concluída, contudo, após aquisição de novos equipamentos de frio, surgiu a necessidade de adquirir novos sensores. O sistema VIGIE prevê estas situações, existindo um alto grau de escalabilidade, para que possam ser incluídos na plataforma um número ilimitado de sensores. Nos GML do Centro e do Sul os sensores ainda se encontram por instalar. Existem ainda sensores de transporte, etapa importante da cadeia de frio, que ainda não estão operacionais, estando prevista a sua ativação brevemente. A análise efetuada revela que, apesar da monitorização da cadeia de frio no INMLCF ter avançado significativamente, o processo de instalação do sistema VIGIE revelou-se mais demorado que o esperado, por razões logísticas (âmbito de implementação nacional, incluindo as ilhas), humanas e informáticas. As próximas etapas para prosseguir com a implementação do sistema de monitorização de temperaturas serão a resolução dos problemas nos GML do Norte, início dos testes com os sensores de transporte entre a delegação do Norte e os correspondentes GML, instalação de sensores e recetores nos GML do Centro e Sul e testes com os sensores de transporte entre estas delegações e os respetivos GML.
- Validação de metodologia analítica para doseamento de biomarcadores de etanol em sangue por LA-MS/MSPublication . Vilas Boas, Ana; Franco, João Miguel; Carmo, Helena; Melo, PaulaO abuso e a dependência de álcool são bastante comuns e têm elevado impacto em questões de saúde e sociais. Desta forma, torna-se importante o desenvolvimento de metodologias para identificar casos de alcoolismo agudo e/ou crónico ou para confirmar a abstinência de etanol em determinadas situações médico-legais. Uma vez que o etanol é rapidamente eliminado do organismo, a validação de metodologias analíticas para a quantificação dos seus biomarcadores de exposição torna-se bastante útil em toxicologia forense, nomeadamente em contextos laborais, em casos de regulação do poder paternal e em situações post-mortem, auxiliando na distinção entre a ingestão e a formação post-mortem de etanol. Os autores apresentam a validação de metodologia analítica para a quantificação de etil-glucuronídeo e etil-sulfato em amostras de sangue, por LC-MS/MS. O método está a ser validado num equipamento de cromatografia líquida Exion LC da Sciex acoplado a um detetor de massa QTrap 6500+, da Sciex, sendo as amostras previamente submetidas a um procedimento de precipitação proteica com metanol. A separação cromatográfica é efetuada recorrendo a uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (2,1*100mm; 1,8 µm de tamanho de partícula), usando como fase móvel uma mistura de ácido fórmico 0,1% e metanol, em gradiente. A deteção dos compostos é efetuada por MRM, sendo a ionização feita por electrospray, em modo negativo, utilizando duas transições para cada um dos compostos e respetivos padrões internos. O método demonstrou ser específico e seletivo. Para os limites de deteção e quantificação foi assumido o valor de 100 ng/mL para os dois compostos, apesar da determinação destes através do método do desvio padrão residual e declive da curva de calibração ter resultado em valores inferiores. O rendimento de extração foi calculado a 2 níveis de concentração, 700 ng/mL e 3000ng/mL tendo-se obtido resultados médios de 82% para o etil-glucuronídeo e de 99% para o etil-sulfato. A linearidade foi avaliada entre as concentrações de 100 e 10000 ng/mL, tendo sido estudados vários fatores de ponderação. A veracidade e precisão encontram-se em fase de avaliação. A determinação destes biomarcadores associada à determinação direta do etanol, contribuirá para uma resposta mais abrangente em contexto forense, permitindo detetar a exposição ao etanol com maior sensibilidade.
- Desenvolvimento de método analítico para a quantificação de biomarcadores de etanol por LC-MS/MSPublication . Melo, Paula; Costa, Pedro; Quintas, Maria José; Sousa, Lara; Franco, João MiguelIntrodução: O etil‐glucuronídeo (EtG) e o etil‐sulfato (EtS) são biomarcadores do consumo de etanol. Estes compostos são metabolitos específicos do etanol resultantes da sua conjugação com uridina‐5 difosfo ácido glucurónico e com a 3‐ fosfoadenosina 5‐fosfosulfato, respetivamente. A sua determinação analítica revela‐se uma mais‐valia em contexto forense, uma vez que estes compostos permanecem detetáveis, em amostras biológicas, durante um período de tempo mais alargado do que o etanol. Desta forma, a sua análise poderá ver vantajosa em casos de alcoolismo, em situações em que é necessário verificar a abstinência do consumo de etanol, em contextos laborais e, em situações post‐mortem, auxiliando na distinção entre a ingestão e a formação post‐mortem de etanol. Material e métodos O método apresentado foi desenvolvido num equipamento de LC‐MS/MS (UPLC) da Waters, tendo as amostras sido previamente submetidas a procedimento de precipitação proteica com acetonitrilo. A separação cromatográfica foi efetuada recorrendo a uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (2,1x 100 mm; 1,8 µm de tamanho de partícula), usando como fase móvel uma mistura de ácido fórmico 0,1% e metanol, em gradiente. A deteção dos compostos foi efetuada por MRM, tendo a ionização sido feita por electrospray, em modo negativo. Resultados: Foram selecionadas duas transições para cada um dos compostos (EtG: 221>75; 221>85; EtS; 124,9>80,1; 129,9>96,9) e uma para o correspondente composto deuterado. O método revelou‐ se rápido, com apenas 6 minutos de análise cromatográfica e de fácil preparação da amostra, permitindo detetar concentrações na ordem dos 100 ng/mL, para ambos os compostos, em amostras de sangue e de urina. Discussão e Conclusões: A deteção de etanol é das análises mais importantes em termos forenses. Uma vez que o etanol é rapidamente eliminado do organismo, revela‐se vantajosa a criação de metodologia para a deteção dos seus biomarcadores. Os biomarcadores de álcool são indicadores fisiológicos de exposição ou ingestão de álcool e podem indiciar consumo de álcool a nível crónico e/ou agudo. Foi desenvolvido um método rápido para análise dos biomarcadores, EtG e ETS em amostras de sangue e de urina. Após a necessária validação e participação adequada em ensaios interlaboratoriais, este método poderá ser utilizado como resposta a questões médico‐legais relacionadas com o consumo de etanol.
- Utilização de nitrito de sódio como meio de suicídio. Nova tendência?Publication . Melo, Paula; Vale, Francisco; Rangel, Rui; Castañera, Antonio; Monsanto, Paula; Franco, João MiguelO nitrito de sódio é um composto inorgânico utilizado como preservante na indústria alimentar, na agricultura, como anticorrosivo e como antídoto em caso de intoxicações por cianetos. O consumo deste composto pode ser potencialmente letal, visto este interferir com a capacidade de os glóbulos vermelhos transportarem o oxigénio, fundamental à vida. O ferro da hemoglobina, na presença deste composto, passa à forma férrica, com a formação da sua forma oxidada, a meta-hemoglobina. Esta não possuiu capacidade de ligação ao oxigénio, ocorrendo hipoxia tecidular e morte por asfixia. Tem-se verificado um aumento dos casos de suicídio com este composto em muitos países, uma vez que, para além da sua fácil acessibilidade em lojas físicas e online e do seu baixo preço, este composto é aconselhado em sites pró-suicídio e no livro “The Peaceful Pill Handook”. Informações e kits de suicídio contendo este composto podem ser facilmente obtidos online, sendo frequentemente aconselhada a toma concomitante de medicação para minimizar a sintomatologia, como por exemplo, anti-eméticos. Este composto é geralmente misturado em água e consumido por via oral. O diagnóstico de intoxicação por nitrito de sódio é geralmente feito através dos dados autópticos (presença de sinais gerais de asfixia; livores de coloração acinzentada/acastanhada; sangue e órgãos de coloração acastanhada), dos achados circunstanciais (embalagem do pó; copos contendo soluções com nitrito de sódio, colheres), dos resultados toxicológicos da quantificação de nitritos e/ou nitratos (formados por oxidação dos nitritos) em diversas amostras biológicas, assim como a análise bioquímica da determinação da percentagem de meta-hemoglobina. O objetivo deste trabalho foi o levantamento dos casos de suicídio por nitrito de sódio ocorridos em Portugal, desde o ano de 2020, ano em que surgiu o primeiro caso no nosso país. Através da plataforma StarLims, foram detetados dois casos de suicídio por este composto em 2020, três casos em 2021 e três casos no corrente ano de 2023. Os casos referiam-se a indivíduos do sexo masculino, com idades compreendidas entre os 17 e os 59 anos. Devido à procura aumentada deste composto com vista ao suicídio revelou-se importante a implementação, no SQTF, de uma metodologia de análise de nitritos em amostras biológicas, por espectrofotometria de absorção molecular UV/VIS. É importante que exista um maior controlo dos sites e fóruns pró-suicídio disponíveis na internet de forma a combater a informação facilitadora deste e de outros métodos de suicídio.
- Suicídio com clomipramina e amissulprida associados a outros psicofármacos: análise de um casoPublication . Melo, Paula; Cardoso, Luís; Sousa, Lara; Quintas, Maria José; Franco, João MiguelIntrodução: A doença mental tem apresentado, cada vez mais, maior prevalência na população e tem sido responsável por variadas incapacidades e contribuído para o aumento dos casos de suicídios. Os autores apresentam um caso de suicídio de um homem de 42 anos, por intoxicação medicamentosa com psicofármacos. A vítima, com antecedentes de esquizofrenia, estava a ser acompanhada em consultas de psiquiatria e não era vista há 3 dias. Foi encontrada cadáver, em decúbito lateral direito, no leito. Material e Métodos: Foram requeridas ao SQTF-N análises de etanol, drogas de abuso e medicamentos. A pesquisa/confirmação/quantificação dos medicamentos foi efetuada por LC-MS/MS, em modo MRM (multiple reaction monitoring), após extração simples por precipitação proteica. O rastreio das drogas de abuso foi efetuado por ensaios imunoenzimáticos. A análise ao etanol foi efetuada por cromatrografia gasosa, com detetor de ionização de chama, e injeção por headspace. Resultados Os resultados toxicológicos obtidos na amostra de sangue periférico da vítima evidenciaram a presença de etanol (1,63 g/L) associado a diversos psicofármacos. Foram detetados, em concentrações habitualmente consideradas letais na bibliografia pesquisada, um antidepressivo tricíclico (clomipramina 2329 ng/mL) e um antipsicótico (amissulprida 31708 ng/mL). Foram ainda detetados mais dois compostos com atividade antipsicótica, a risperidona, em concentração considerada tóxica (260 ng/mL), e o seu metabolito ativo, a paliperidona (20 ng/mL). Foram também detetadas várias benzodiazepinas em concentrações habitualmente consideradas terapêuticas (flurazepam, desalquilflurazepam, diazepam, nordiazepam, temazepam, alprazolam) e o anticonvulsivo carbamazepina, também em concentração terapêutica. Não foi detetada a presença de drogas de abuso. Discussão Em face dos dados necrópsicos e dos resultados dos exames toxicológicos solicitados, a morte do caso descrito foi devida a intoxicação medicamentosa com uma etiologia médico-legal suicida. Os suicídios representam um problema global de saúde pública. A avaliação do risco de suicídio é por vezes difícil dado que os pacientes podem ocultar sintomatologia depressiva e intencionalidade auto-lesiva. Nos casos em que há suspeitas de ideação suicida é recomendada a vigilância terapêutica e limitação do acesso a meios letais, incluindo o acesso fácil a grandes quantidades de psicofármacos, evitando, desta forma, o seu uso indevido, promovendo o seu uso para fins exclusivamente terapêuticos.