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- Validação de metodologia analítica para doseamento de biomarcadores de etanol em sangue por LA-MS/MSPublication . Vilas Boas, Ana; Franco, João Miguel; Carmo, Helena; Melo, PaulaO abuso e a dependência de álcool são bastante comuns e têm elevado impacto em questões de saúde e sociais. Desta forma, torna-se importante o desenvolvimento de metodologias para identificar casos de alcoolismo agudo e/ou crónico ou para confirmar a abstinência de etanol em determinadas situações médico-legais. Uma vez que o etanol é rapidamente eliminado do organismo, a validação de metodologias analíticas para a quantificação dos seus biomarcadores de exposição torna-se bastante útil em toxicologia forense, nomeadamente em contextos laborais, em casos de regulação do poder paternal e em situações post-mortem, auxiliando na distinção entre a ingestão e a formação post-mortem de etanol. Os autores apresentam a validação de metodologia analítica para a quantificação de etil-glucuronídeo e etil-sulfato em amostras de sangue, por LC-MS/MS. O método está a ser validado num equipamento de cromatografia líquida Exion LC da Sciex acoplado a um detetor de massa QTrap 6500+, da Sciex, sendo as amostras previamente submetidas a um procedimento de precipitação proteica com metanol. A separação cromatográfica é efetuada recorrendo a uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (2,1*100mm; 1,8 µm de tamanho de partícula), usando como fase móvel uma mistura de ácido fórmico 0,1% e metanol, em gradiente. A deteção dos compostos é efetuada por MRM, sendo a ionização feita por electrospray, em modo negativo, utilizando duas transições para cada um dos compostos e respetivos padrões internos. O método demonstrou ser específico e seletivo. Para os limites de deteção e quantificação foi assumido o valor de 100 ng/mL para os dois compostos, apesar da determinação destes através do método do desvio padrão residual e declive da curva de calibração ter resultado em valores inferiores. O rendimento de extração foi calculado a 2 níveis de concentração, 700 ng/mL e 3000ng/mL tendo-se obtido resultados médios de 82% para o etil-glucuronídeo e de 99% para o etil-sulfato. A linearidade foi avaliada entre as concentrações de 100 e 10000 ng/mL, tendo sido estudados vários fatores de ponderação. A veracidade e precisão encontram-se em fase de avaliação. A determinação destes biomarcadores associada à determinação direta do etanol, contribuirá para uma resposta mais abrangente em contexto forense, permitindo detetar a exposição ao etanol com maior sensibilidade.
- Desenvolvimento de método analítico para a quantificação de biomarcadores de etanol por LC-MS/MSPublication . Melo, Paula; Costa, Pedro; Quintas, Maria José; Sousa, Lara; Franco, João MiguelIntrodução: O etil‐glucuronídeo (EtG) e o etil‐sulfato (EtS) são biomarcadores do consumo de etanol. Estes compostos são metabolitos específicos do etanol resultantes da sua conjugação com uridina‐5 difosfo ácido glucurónico e com a 3‐ fosfoadenosina 5‐fosfosulfato, respetivamente. A sua determinação analítica revela‐se uma mais‐valia em contexto forense, uma vez que estes compostos permanecem detetáveis, em amostras biológicas, durante um período de tempo mais alargado do que o etanol. Desta forma, a sua análise poderá ver vantajosa em casos de alcoolismo, em situações em que é necessário verificar a abstinência do consumo de etanol, em contextos laborais e, em situações post‐mortem, auxiliando na distinção entre a ingestão e a formação post‐mortem de etanol. Material e métodos O método apresentado foi desenvolvido num equipamento de LC‐MS/MS (UPLC) da Waters, tendo as amostras sido previamente submetidas a procedimento de precipitação proteica com acetonitrilo. A separação cromatográfica foi efetuada recorrendo a uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (2,1x 100 mm; 1,8 µm de tamanho de partícula), usando como fase móvel uma mistura de ácido fórmico 0,1% e metanol, em gradiente. A deteção dos compostos foi efetuada por MRM, tendo a ionização sido feita por electrospray, em modo negativo. Resultados: Foram selecionadas duas transições para cada um dos compostos (EtG: 221>75; 221>85; EtS; 124,9>80,1; 129,9>96,9) e uma para o correspondente composto deuterado. O método revelou‐ se rápido, com apenas 6 minutos de análise cromatográfica e de fácil preparação da amostra, permitindo detetar concentrações na ordem dos 100 ng/mL, para ambos os compostos, em amostras de sangue e de urina. Discussão e Conclusões: A deteção de etanol é das análises mais importantes em termos forenses. Uma vez que o etanol é rapidamente eliminado do organismo, revela‐se vantajosa a criação de metodologia para a deteção dos seus biomarcadores. Os biomarcadores de álcool são indicadores fisiológicos de exposição ou ingestão de álcool e podem indiciar consumo de álcool a nível crónico e/ou agudo. Foi desenvolvido um método rápido para análise dos biomarcadores, EtG e ETS em amostras de sangue e de urina. Após a necessária validação e participação adequada em ensaios interlaboratoriais, este método poderá ser utilizado como resposta a questões médico‐legais relacionadas com o consumo de etanol.
- Utilização de nitrito de sódio como meio de suicídio. Nova tendência?Publication . Melo, Paula; Vale, Francisco; Rangel, Rui; Castañera, Antonio; Monsanto, Paula; Franco, João MiguelO nitrito de sódio é um composto inorgânico utilizado como preservante na indústria alimentar, na agricultura, como anticorrosivo e como antídoto em caso de intoxicações por cianetos. O consumo deste composto pode ser potencialmente letal, visto este interferir com a capacidade de os glóbulos vermelhos transportarem o oxigénio, fundamental à vida. O ferro da hemoglobina, na presença deste composto, passa à forma férrica, com a formação da sua forma oxidada, a meta-hemoglobina. Esta não possuiu capacidade de ligação ao oxigénio, ocorrendo hipoxia tecidular e morte por asfixia. Tem-se verificado um aumento dos casos de suicídio com este composto em muitos países, uma vez que, para além da sua fácil acessibilidade em lojas físicas e online e do seu baixo preço, este composto é aconselhado em sites pró-suicídio e no livro “The Peaceful Pill Handook”. Informações e kits de suicídio contendo este composto podem ser facilmente obtidos online, sendo frequentemente aconselhada a toma concomitante de medicação para minimizar a sintomatologia, como por exemplo, anti-eméticos. Este composto é geralmente misturado em água e consumido por via oral. O diagnóstico de intoxicação por nitrito de sódio é geralmente feito através dos dados autópticos (presença de sinais gerais de asfixia; livores de coloração acinzentada/acastanhada; sangue e órgãos de coloração acastanhada), dos achados circunstanciais (embalagem do pó; copos contendo soluções com nitrito de sódio, colheres), dos resultados toxicológicos da quantificação de nitritos e/ou nitratos (formados por oxidação dos nitritos) em diversas amostras biológicas, assim como a análise bioquímica da determinação da percentagem de meta-hemoglobina. O objetivo deste trabalho foi o levantamento dos casos de suicídio por nitrito de sódio ocorridos em Portugal, desde o ano de 2020, ano em que surgiu o primeiro caso no nosso país. Através da plataforma StarLims, foram detetados dois casos de suicídio por este composto em 2020, três casos em 2021 e três casos no corrente ano de 2023. Os casos referiam-se a indivíduos do sexo masculino, com idades compreendidas entre os 17 e os 59 anos. Devido à procura aumentada deste composto com vista ao suicídio revelou-se importante a implementação, no SQTF, de uma metodologia de análise de nitritos em amostras biológicas, por espectrofotometria de absorção molecular UV/VIS. É importante que exista um maior controlo dos sites e fóruns pró-suicídio disponíveis na internet de forma a combater a informação facilitadora deste e de outros métodos de suicídio.
- Suicídio com clomipramina e amissulprida associados a outros psicofármacos: análise de um casoPublication . Melo, Paula; Cardoso, Luís; Sousa, Lara; Quintas, Maria José; Franco, João MiguelIntrodução: A doença mental tem apresentado, cada vez mais, maior prevalência na população e tem sido responsável por variadas incapacidades e contribuído para o aumento dos casos de suicídios. Os autores apresentam um caso de suicídio de um homem de 42 anos, por intoxicação medicamentosa com psicofármacos. A vítima, com antecedentes de esquizofrenia, estava a ser acompanhada em consultas de psiquiatria e não era vista há 3 dias. Foi encontrada cadáver, em decúbito lateral direito, no leito. Material e Métodos: Foram requeridas ao SQTF-N análises de etanol, drogas de abuso e medicamentos. A pesquisa/confirmação/quantificação dos medicamentos foi efetuada por LC-MS/MS, em modo MRM (multiple reaction monitoring), após extração simples por precipitação proteica. O rastreio das drogas de abuso foi efetuado por ensaios imunoenzimáticos. A análise ao etanol foi efetuada por cromatrografia gasosa, com detetor de ionização de chama, e injeção por headspace. Resultados Os resultados toxicológicos obtidos na amostra de sangue periférico da vítima evidenciaram a presença de etanol (1,63 g/L) associado a diversos psicofármacos. Foram detetados, em concentrações habitualmente consideradas letais na bibliografia pesquisada, um antidepressivo tricíclico (clomipramina 2329 ng/mL) e um antipsicótico (amissulprida 31708 ng/mL). Foram ainda detetados mais dois compostos com atividade antipsicótica, a risperidona, em concentração considerada tóxica (260 ng/mL), e o seu metabolito ativo, a paliperidona (20 ng/mL). Foram também detetadas várias benzodiazepinas em concentrações habitualmente consideradas terapêuticas (flurazepam, desalquilflurazepam, diazepam, nordiazepam, temazepam, alprazolam) e o anticonvulsivo carbamazepina, também em concentração terapêutica. Não foi detetada a presença de drogas de abuso. Discussão Em face dos dados necrópsicos e dos resultados dos exames toxicológicos solicitados, a morte do caso descrito foi devida a intoxicação medicamentosa com uma etiologia médico-legal suicida. Os suicídios representam um problema global de saúde pública. A avaliação do risco de suicídio é por vezes difícil dado que os pacientes podem ocultar sintomatologia depressiva e intencionalidade auto-lesiva. Nos casos em que há suspeitas de ideação suicida é recomendada a vigilância terapêutica e limitação do acesso a meios letais, incluindo o acesso fácil a grandes quantidades de psicofármacos, evitando, desta forma, o seu uso indevido, promovendo o seu uso para fins exclusivamente terapêuticos.