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Exposição a radiação ultravioleta - qual o impacto na amplificação de STRs pelo Investigator® 26Plex QS?
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| Poster apresentado no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego, 2023 | 1.66 MB | Adobe PDF |
Advisor(s)
Abstract(s)
A análise de amostras problema com dois ou mais contribuintes reveste-se de
especial dificuldade, pelo que é necessária a utilização de um kit de amplificação
robusto e com elevada sensibilidade. O Investigator 26Plex QS da Qiagen permite
a obtenção de um perfil completo para concentrações de 0,1 ng de ADN – Low
Template DNA. Contudo, esta capacidade de analisar ínfimas quantidades de
material biológico constituiu-se igualmente como uma limitação ao permitir a
deteção de contaminações residuais. Por conseguinte, é fulcral instaurar
medidas preventivas que acautelem esta ocorrência. A radiação ultravioleta (UV)
provoca na molécula de ADN alterações morfológicas, das quais a com maior
impacto se deve à ocorrência de dímeros de timina que, ao impedirem o
acoplamento da Taq polimerase à cadeia molde, impossibilitam a amplificação
dos fragmentos de ADN. O presente trabalho teve como principal objetivo aferir a
performance do kit Investigator 26Plex QS na amplificação de amostras
submetidas a radiação UV. Com este propósito, prepararam-se 5 alíquotas com
10 μL de produto extraído por Prep-n-Go, provenientes de uma amostra segura, à
concentração de 1,5 ng/μL. As 5 alíquotas foram expostas a irradiação UV
durante 2, 5, 10, 15 e 20 minutos respetivamente e, de seguida, amplificadas.
Similarmente, uma mancha de sangue adequadamente impregnada - com
sensivelmente 125 μl de sangue - foi colocada sob irradiação durante o mesmo
período. A cada intervalo realizou-se um punch de 0,5 mm, seguindo-se extração
pela mesma metodologia. Os resultados obtidos permitiram verificar que para
uma mancha de sangue preservada em cartão FTA, o efeito da radiação não é
particularmente significativo, averiguando-se que mesmo após o período de
exposição mais elevado, foi possível uma adequada análise do perfil genético
obtido. Este resultado poderá dever-se às propriedades químicas dos cartões FTA
que possibilitam uma adequada preservação do material biológico. Pelo
contrário, no caso do produto extraído, verificou-se uma queda substancial dos
alelos com tamanho superior a 214 pb, imediatamente a partir dos 2 minutos. A
cada período, verificou-se uma redução na intensidade dos alelos detetados, assim como no número de marcadores genotipados. Na amostra sujeita a
radiação UV durante 20 minutos foi ainda possível identificar dois alelos de dois
diferentes marcadores. Não obstante, a deteção de dois alelos provenientes de
uma possível contaminação na câmara de trabalho poderia comprometer a
interpretação de um perfil de mistura, reiterando a importância de higienizar a
workstation antes e após a sua utilização. Em suma, este kit de amplificação
devido à sua elevada robustez, permitiu a identificação de dois alelos aquando da
exposição a UV durante 20 minutos, pelo que, de forma a evitarem-se
contaminações pontuais, o procedimento laboratorial deverá ser precedido e
seguido pela descontaminação das superfícies, camaras de trabalho e material
utilizado, por pelo menos 20 minutos.
Description
Poster apresentado no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego, 2023
Keywords
PCR Degradação Radiação UV