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ADN mitocondrial: Estudo de validação interna de metodologia de sequenciação

2024-10-17Conference object Open access
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dc.contributor.authorDomingos, Margarida
dc.contributor.authorAfonso Costa, Heloísa
dc.contributor.authorNascimento, Rui
dc.contributor.authorFeiteiro, Mariana
dc.contributor.authorCorte Real, Francisco
dc.contributor.authorAmorim, António
dc.date.accessioned2025-01-16T09:55:49Z
dc.date.available2025-01-16T09:55:49Z
dc.date.issued2024-10-17
dc.descriptionComunicação Oral realizada no 22º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, 17-19 de outubro de 2024, Estoril, Portugalpt_PT
dc.description.abstractEm genética forense, a sequenciação do ADN mitocondrial (ADNmt) pode ser uma ferramenta crucial designadamente sempre que não é possível obter ADN nuclear (ADNn) analisável, a partir das amostras biológicas. Amostras recolhidas em cadáveres em avançado estado de decomposição e cabelos ou pêlos recolhidos em local de crime são exemplos de amostras biológicas a partir das quais a análise do ADNmt pode ser o único meio de prova genético. O ADNmt é vantajoso por existir em maior quantidade do que o ADNn, mas tem a desvantagem de ser um elemento não individualizante, sendo comum a todos os indivíduos da mesma linhagem materna. O Serviço de Genética e Biologia Forenses (SGBF) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF), está a implementar a sequenciação massiva em paralelo (MPS), sequenciação de segunda geração. A MPS, relativamente à técnica de sequenciação de Sanger (SS), tem como vantagens, desde logo, permitir sequenciar o genoma mitocondrial completo e oferecer a capacidade de analisar múltiplas amostras biológicas em simultâneo. Com o objetivo de implementar e validar a sequenciação do genoma mitocondrial por MPS foi avaliada a concordância entre as metodologias SS e MPS. Foram selecionadas 64 amostras biológicas, previamente estudadas e analisadas pela metodologia SS. Para o estudo pela metodologia MPS as amostras foram extraídas com PrepFiler Express BTA™ Forensic DNA Extraction Kit e quantificadas com Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit. A preparação de bibliotecas de ADNmt foi feita num equipamento Ion Chef™ com o Precision ID mtDNA Whole Genome Panel e o Precision ID DL8 Kit. Na quantificação das bibliotecas de ADNmt foi utilizado o Ion Library TaqMan™ Quantitation Kit. A preparação do template e carregamento do Ion 530™ Chip foi realizada no Ion Chef™ com os kits Ion S5™ Precision ID Chef & Sequencing Kit. A sequenciação, através da deteção de alterações de pH provocada pela libertação de iões de hidrogénio (H+), ocorridas durante a polimerização do ADN e incorporação de bases, foi realizada num Ion GeneStudio™ S5 System e em conjunto com o sistema Ion Torrent™ que determinou a sequência da molécula em estudo, transformando o sinal químico em sinal digital. A análise e determinação do haplótipo do ADNmt foi realizada com o Converge™ Software. O haplótipo de ADNmt determinado com as metodologias SS e MPS foi coincidente em todas as amostras. Adicionalmente, a metodologia MPS aumentou a eficiência e precisão na análise das amostras de ADNmt. A simplicidade do sistema MPS elimina a necessidade de utilização de nucleotídeos modificados, de lasers, scanners e câmaras de deteção, garantindo exatidão na deteção dos polimorfismos. Este sistema garante ainda uma cobertura homogénea da sequência em estudo, até mesmo em regiões ricas em conteúdo GC e regiões homopoliméricas.pt_PT
dc.description.versionN/Apt_PT
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10400.26/53859
dc.language.isoporpt_PT
dc.peerreviewedyespt_PT
dc.publisher22º CONGRESSO NACIONAL DE MEDICINA LEGAL E CIÊNCIAS FORENSESpt_PT
dc.subjectADN mitocondrialpt_PT
dc.subjectSequenciação de Sangerpt_PT
dc.subjectSequenciação Massiva em Paralelopt_PT
dc.titleADN mitocondrial: Estudo de validação interna de metodologia de sequenciaçãopt_PT
dc.typeconference object
dspace.entity.typePublication
oaire.citation.conferencePlaceEstoril, Portugalpt_PT
person.familyNameAfonso Costa
person.familyNameCosta Marcos do Nascimento
person.familyNameCorte Real Gonçalves
person.familyNameAmorim
person.givenNameHeloísa
person.givenNameRui Francisco
person.givenNameFrancisco
person.givenNameAntónio
person.identifier.ciencia-idCB1A-8B8D-78F1
person.identifier.ciencia-id0B18-918A-80ED
person.identifier.orcid0000-0002-7823-7687
person.identifier.orcid0000-0002-0478-336X
person.identifier.orcid0000-0003-1495-9362
person.identifier.orcid0000-0002-7506-4426
person.identifier.ridJ-5725-2015
person.identifier.ridA-4414-2013
person.identifier.scopus-author-id24729171700
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rcaap.rightsopenAccesspt_PT
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