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Estudo comparativo e de validação de ensaios de quantificação de DNA, total e fração masculina, em amostras forenses, com diferentes metodologias e equipamentos

2024-10-17Other Open access
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dc.contributor.authorFeiteiro, Mariana
dc.contributor.authorAfonso Costa, Heloísa
dc.contributor.authorNascimento, Rui
dc.contributor.authorDomingos, Margarida
dc.contributor.authorCunha, Eugénia
dc.contributor.authorCorte Real, Francisco
dc.contributor.authorAmorim, António
dc.date.accessioned2025-01-16T18:10:58Z
dc.date.available2025-01-16T18:10:58Z
dc.date.issued2024-10-17
dc.descriptionComunicação Oral realizada no 22º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, 17-19 de outubro, Estoril, Portugalpt_PT
dc.description.abstractA Genética Forense utiliza o DNA como o alvo de análise, sendo este um dos objetos de estudo mais importantes na análise forense, devido ao seu elevado potencial de individualização. A análise das amostras biológicas é realizada com o intuito de identificar o perfil genético dos vários envolventes, sendo que a quantidade de DNA presente nas mesmas pode variar consideravelmente, dependendo dos fatores a que estão expostas, o que poderá colocar em causa a obtenção do seu perfil genético. A quantificação do DNA no âmbito da Genética Forense tem um papel relevante para a obtenção de bons resultados, permitindo a análise da quantidade e qualidade do DNA presente numa amostra biológica, de forma a adaptar o restante protocolo para a obtenção de perfis genéticos ideais. A técnica de qPCR é considerada uma das mais precisas e sensíveis para quantificação de DNA, permitindo acompanhar em tempo real, ciclo a ciclo, o produto amplificado, através da alteração no sinal de fluorescência, detetado pelo termociclador. Para a implementação e utilização de um método é necessária a sua prévia validação, de forma a testar as suas capacidades e determinar vantagens e desvantagens do mesmo. No Serviço de Genética e Biologia Forenses da Delegação do Sul (SGBF-S) do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. (INMLCF), procedeu-se à validação interna de dois procedimentos de quantificação de DNA: os kits Quantifiler Trio e Investigator Quantiplex aplicados aos equipamentos QuantStudio 5 Real-Time PCR System for Human Identification e CFX Opus 96 Real-Time PCR System, respetivamente. Ambos os kits apresentam como alvos de amplificação duas regiões de DNA autossómico, uma large e uma small, e uma região alvo masculina. Relativamente aos equipamentos estudados, estes utilizam um conjunto de até 6 filtros associados a determinados corantes fluorescentes, que permitem a deteção de fluorescência na amostra, traduzindo-se na quantificação de DNA na mesma. A validação dos dois ensaios foi baseada no documento de validação interna do serviço, Procedimento Geral de Validação de Ensaios, dos quais foram testados, através de amostras controlo de concentração conhecida, diversos parâmetros: especificidade, sensibilidade, repetibilidade, reprodutibilidade e capacidade de diferenciação de misturas de material genético feminino e masculino, assim como a análise de amostras reais de forma a mimetizar a rotina laboratorial. Até ao momento, através dos estudos realizados, permite-se afirmar que ambos os ensaios são específicos para DNA humano e têm vindo a apresentar resultados semelhantes e esperados para os parâmetros em estudo. Contudo, constatou-se que não é possível a determinação do índice de degradação no ensaio do kit Investigator Quantiplex, devido à incompatibilidade na deteção do fluoróforo correspondente ao fragmento de DNA large, necessário para o cálculo do mesmo.pt_PT
dc.description.versionN/Apt_PT
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10400.26/53878
dc.language.isoporpt_PT
dc.peerreviewedyespt_PT
dc.subjectDNA Nuclearpt_PT
dc.subjectQuantificaçãopt_PT
dc.subjectValidaçãopt_PT
dc.titleEstudo comparativo e de validação de ensaios de quantificação de DNA, total e fração masculina, em amostras forenses, com diferentes metodologias e equipamentospt_PT
dc.typeother
dspace.entity.typePublication
oaire.citation.conferencePlaceEstoril, Portugalpt_PT
oaire.citation.title22º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forensespt_PT
person.familyNameAfonso Costa
person.familyNameCosta Marcos do Nascimento
person.familyNameCunha
person.familyNameCorte Real Gonçalves
person.familyNameAmorim
person.givenNameHeloísa
person.givenNameRui Francisco
person.givenNameEugénia
person.givenNameFrancisco
person.givenNameAntónio
person.identifierhttps://scholar.google.pt/citations?user=HSGHLA0AAAAJ&hl=en
person.identifier.ciencia-idCB1A-8B8D-78F1
person.identifier.ciencia-idE717-5464-E13B
person.identifier.ciencia-id0B18-918A-80ED
person.identifier.orcid0000-0002-7823-7687
person.identifier.orcid0000-0002-0478-336X
person.identifier.orcid0000-0003-2998-371X
person.identifier.orcid0000-0003-1495-9362
person.identifier.orcid0000-0002-7506-4426
person.identifier.ridJ-5725-2015
person.identifier.ridA-4414-2013
person.identifier.scopus-author-id24729171700
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