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- Exposição a radiação ultravioleta - qual o impacto na amplificação de STRs pelo Investigator® 26Plex QS?Publication . Cardoso, Paula; Serra, Armando; Bogas, Vanessa; Balsa, Filipa; Lopes, Virgínia; Porto, Maria João; Amorim, António; Corte Real, Francisco; Brito, PedroA análise de amostras problema com dois ou mais contribuintes reveste-se de especial dificuldade, pelo que é necessária a utilização de um kit de amplificação robusto e com elevada sensibilidade. O Investigator 26Plex QS da Qiagen permite a obtenção de um perfil completo para concentrações de 0,1 ng de ADN – Low Template DNA. Contudo, esta capacidade de analisar ínfimas quantidades de material biológico constituiu-se igualmente como uma limitação ao permitir a deteção de contaminações residuais. Por conseguinte, é fulcral instaurar medidas preventivas que acautelem esta ocorrência. A radiação ultravioleta (UV) provoca na molécula de ADN alterações morfológicas, das quais a com maior impacto se deve à ocorrência de dímeros de timina que, ao impedirem o acoplamento da Taq polimerase à cadeia molde, impossibilitam a amplificação dos fragmentos de ADN. O presente trabalho teve como principal objetivo aferir a performance do kit Investigator 26Plex QS na amplificação de amostras submetidas a radiação UV. Com este propósito, prepararam-se 5 alíquotas com 10 μL de produto extraído por Prep-n-Go, provenientes de uma amostra segura, à concentração de 1,5 ng/μL. As 5 alíquotas foram expostas a irradiação UV durante 2, 5, 10, 15 e 20 minutos respetivamente e, de seguida, amplificadas. Similarmente, uma mancha de sangue adequadamente impregnada - com sensivelmente 125 μl de sangue - foi colocada sob irradiação durante o mesmo período. A cada intervalo realizou-se um punch de 0,5 mm, seguindo-se extração pela mesma metodologia. Os resultados obtidos permitiram verificar que para uma mancha de sangue preservada em cartão FTA, o efeito da radiação não é particularmente significativo, averiguando-se que mesmo após o período de exposição mais elevado, foi possível uma adequada análise do perfil genético obtido. Este resultado poderá dever-se às propriedades químicas dos cartões FTA que possibilitam uma adequada preservação do material biológico. Pelo contrário, no caso do produto extraído, verificou-se uma queda substancial dos alelos com tamanho superior a 214 pb, imediatamente a partir dos 2 minutos. A cada período, verificou-se uma redução na intensidade dos alelos detetados, assim como no número de marcadores genotipados. Na amostra sujeita a radiação UV durante 20 minutos foi ainda possível identificar dois alelos de dois diferentes marcadores. Não obstante, a deteção de dois alelos provenientes de uma possível contaminação na câmara de trabalho poderia comprometer a interpretação de um perfil de mistura, reiterando a importância de higienizar a workstation antes e após a sua utilização. Em suma, este kit de amplificação devido à sua elevada robustez, permitiu a identificação de dois alelos aquando da exposição a UV durante 20 minutos, pelo que, de forma a evitarem-se contaminações pontuais, o procedimento laboratorial deverá ser precedido e seguido pela descontaminação das superfícies, camaras de trabalho e material utilizado, por pelo menos 20 minutos.