Browsing by Author "Pimentel, Mariana"
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- Estudo da correlação entre a presença de sémen e de ADN masculino em amostras forenses de casos de agressão sexualPublication . Pimentel, Mariana; Dourado, Catarina; Lucas, Isabel; Amorim, António; Vieira da Silva, CláudiaNos casos de investigação criminal que envolvem agressão sexual, a abordagem laboratorial tem como objetivo a determinação da existência de fluídos corporais, nomeadamente sémen, e a respetiva identificação genética, que por análise comparativa contribui para a identificação do contribuinte para determinado vestígio. O sémen é um dos vestígios biológicos com maior predominância nos processos de agressão sexual, pelo que a sua deteção tem particular importância. Este fluído biológico contém uma glicoproteína designada por PSA (Antigénio Prostático Específico), que contribui para a liquefação do sémen, facilitando a mobilidade dos espermatozoides. A identificação positiva de sémen pode ser extremamente importante para suportar a alegação de um crime de abuso sexual, pelo que testes de orientação e de certeza são pertinentes para a identificação deste fluido biológico. No SGBF-S, a presença de sémen é detetada através do teste SERATEC® PSA semiquant test (SERATEC®), que deteta a presença da PSA através de dois anticorpos monoclonais. Deste método resulta uma reação colorimétrica, cujos resultados são classificados internamente com base na intensidade da banda teste, em comparação com o controlo positivo interno. A determinação da presença de sémen é efetuada em paralelo com a extração e quantificação de ADN, com o objetivo de tomar decisões relativamente aos marcadores genéticos a amplificar. Este trabalho tem como objetivo determinar a relação entre a presença de sémen e a concentração de ADN masculino presente na amostra biológica. Foi recolhida a informação de 100 processos estudados no SGBF-S, num total de 380 amostras analisadas. Foram comparados os resultados das provas de orientação com os resultados de quantificação para ADN masculino. A extração de ADN foi efetuada pelo método PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™) num AutoMate Express Forensic DNA Extraction System e a quantificação pelo método de Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) num equipamento 7500 Real-Time PCR System. Os resultados das provas de orientação foram convertidos numa escala de 1 (negativo) a 5 (positivo intenso), Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses 2 / 2 de acordo com a intensidade obtida. A análise descritiva efetuada no Excel, permitiu verificar que foram obtidos resultados de concentração de ADN masculino nulos ou muito próximos de nulo, independentemente da intensidade da reação colorimétrica do Seratec. Paralelamente verificamos valores até 0.4221 ng/μL em amostras com reação negativa para a pesquisa de sémen. Estes resultados parecem indicar que a presença de ADN masculino pode ter outra origem distinta da presença de sémen. Não obstante, tal como esperado, observa-se que, tendencialmente, a presença de ADN masculino parece estar correlacionada com a intensidade da reação de pesquisa de sémen pelo método descrito.
- Estudo de cabelos comparação de metodologias de extração de ADNPublication . Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Olivera, Ana Rita; Vieira da Silva, CláudiaEm investigações biológicas forenses, sobretudo em perícias de âmbito criminal, surgem por vezes amostras de cabelos que requerem identificação genética.Deste modo, é de especial importância que sejam implementadas metodologias que permitam a obtenção de uma concentração de ADN suficiente e de boa qualidade para se conseguir como resultado final um perfil genético robusto e valorizável. Tendo o SGBF-S o objetivo de acreditar os ensaios em amostras forenses, particularmente as amostras de cabelos, foi elaborado um estudo para validar a metodologia de extração de ADN mais adequada para este tipo de amostra. Para atingir o objetivo deste trabalho, foram colhidos 4 a 6 cabelos a cada um de 10 colaboradores do Serviço, cujos perfis genéticos estavam previamente determinados. Foram utilizados 2 a 3 cabelos de cada colaborador para extração com cada um dos diferentes kits amplamente utilizados no Serviço em amostras problema - PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™) e PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit (Applied Biosystems™). As amostras extraídas foram quantificadas com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) e amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification Kit (Applied Biosystems™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). A análise dos resultados obtidos permite verificar que as amostras extraídas com PrepFiler Express™ apresentam concentrações significativamente mais elevadas de ADN total, comparativamente às amostras extraídas com PrepFiler™ BTA. Foram obtidos perfis genéticos completos para todas as amostras extraídas com PrepFiler Express™. No caso das amostras extraídas com PrepFiler™ BTA, apenas foram obtidos perfis genéticos completos para 8 das 10 amostras. Não foi possível obter qualquer perfil a partir das duas restantes amostras. Assim, pelo presente estudo podemos concluir que a metodologia de extração de ADN com PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction Kit é mais adequada do que a metodologia de Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses 2 / 2 extração com PrepFiler™ BTA Forensic DNA Extraction Kit, para a obtenção de ADN a partir de amostras de cabelos.
- Influência do tipo de zaragatoa bucal na obtenção de perfis genéticosPublication . Dario, Ana Rita; Dourado, Catarina; Pimentel, Mariana; Lucas, Isabel; Marcelino, Miguel; Vieira da Silva, Cláudia; Amorim, AntónioNo âmbito das investigações biológicas forenses é necessário utilizar amostras de referência, geralmente sangue ou saliva. Estas amostras, se colhidas corretamente e armazenadas em condições adequadas, não apresentam problemas de escassez de material genético e mantêm-se estáveis, por um longo período de tempo. Atualmente, no SGBF-S são preferencialmente colhidas, apenas, duas zaragatoas bucais, a cada interveniente, sendo por isso, de extrema importância, a utilização do tipo de zaragatoas mais adequado para este tipo de colheita, visto que não existirá, como alternativa, o suporte de mancha de sangue. Assim, para além de outros fatores, nomeadamente o correto acondicionamento e preservação das amostras colhidas, existe um de grande importância a considerar - o tipo de suporte - uma vez que pode condicionar a quantidade de ADN presente na amostra. O presente trabalho pretende identificar se a ausência da obtenção de um perfil genético completo está relacionada com o tipo de zaragatoa usada na colheita da amostra. Foram analisadas amostras extraídas com Prep-n-Go™ Buffer (Applied Biosystems™), amplificadas para STRs autossómicos com os kits PowerPlex® Fusion 6C System (Promega Corporation) e GlobalFiler™ PCR Amplification (Applied Biosystems™). ™). A análise de fragmentos foi efetuada por eletroforese capilar no sequenciador automático 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems™) e analisadas com o software GeneMapper® ID-X 1.4 (Applied Biosystems™). Nos casos em que não foi obtido um perfil completo, repetiu-se a extração com um kit mais sensível e eficaz – PrepFiler Express™ Forensic DNA Extraction (Applied Biosystems™), e posteriormente a quantificação com o kit Quantifiler™ Trio DNA Quantification Kit (Applied Biosystems™) desta nova extração, como da anterior. Apesar da grande eficácia e sensibilidade desta metodologia de extração, nem sempre foi possível obter um perfil genético valorizável. Para a resolução de algumas perícias, foi possível recorrer à amostra complementar (mancha de sangue) e realizar os procedimentos laboratoriais adequados. Noutras situações, foi mesmo necessário proceder a nova colheita. Na casuística do Laboratório, verificou-se que a ausência de perfis genéticos ou presença de perfis não valorizáveis ou incompletos está, frequentemente, relacionada com o tipo de zaragatoa utilizada na colheita de células do epitélio bucal. Assim, concluiu-se que o tipo de zaragatoa dentada, de extremidade descartável, conduz regularmente à obtenção de um perfil genético robusto. Após o estudo efetuado, recomenda-se o uso de zaragatoas dentadas com extremidade descartável, em detrimento de outros tipos de zaragatoas bucais.
- Raspados subungueais em contexto de agressões sexuais: a importância da sua colheitaPublication . Dario, Ana Rita; Dourado, Catarina G.; Pimentel, Mariana; Amorim, António; Carvalho, MónicaEm crimes de agressão/abuso sexual, os critérios utilizados no exame clínico efetuado e a escolha dos vestígios biológicos a colher no corpo da vítima, por parte do perito médico, são de extrema importância para uma eventual identificação futura do agressor. Colheitas que não as mais adequadas podem conduzir a uma perda irrecuperável das evidências. São colhidas, de acordo com a informação dada pela vítima, zaragatoas do exsudado vaginal, vulvar, anal e de limpeza de pele, peças de roupa, pensos higiénicos, embora atualmente comecem a ser colhidos outros tipos de vestígios biológicos, como raspados subungueais. O objetivo deste trabalho é realçar a importância da recolha de raspados subungueais da vítima de abuso sexual, caso tenham ocorrido arranhões por parte da vítima, uma vez que este vestígio biológico pode ser determinante na identificação do agressor. Neste caso de estudo foram colhidas zaragatoas vaginais, vulvar, anal e perianal, um penso higiénico e raspados subungueais, da mão direita e mão esquerda. A prova de orientação de sémen não evidenciou a presença deste fluído em nenhuma das zaragatoas e penso higiénico, nem foi possível identificar um perfil genético nestas amostras. No penso higiénico e nos raspados foi obtido o mesmo haplótipo do cromossoma Y. Porém, apenas nos raspados subungueais, da mão direita e mão esquerda, foi identificado o mesmo perfil genético de mistura (feminino e masculino), compatível com o perfil da vítima e com o perfil de outro indivíduo. Este perfil genético de mistura poderá ser utilizado em estudos comparativos futuros, sendo para tal necessário material biológico de referência do suspeito, ou inserido na Base de Dados de Perfis de ADN. É de salientar, que neste caso de estudo, os raspados subungueais foram as únicas amostras colhidas onde foi possível obter um perfil genético de mistura com STRs autossómicos que poderá conduzir à identificação do agressor, o que demonstra a importância da recolha deste tipo de vestígios biológicos, constituindo um importante meio de prova a resolução de casos de agressão sexual.