Browsing by Author "Ferreira, Bárbara Joana Malta"
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- Development and validation of a real-time PCR assay for the detection of avian coronavirusPublication . Ferreira, Bárbara Joana Malta; Anastácio, Sofia FerreiraA bronquite infecciosa aviária, causada por um coronavírus aviário, é um grave problema na produção avícola em todo o mundo, sendo responsável por perdas económicas significativas, com uma taxa de morbilidade a rondar os cem por cento. A principal forma de prevenção e controlo desta doença é conseguida através da vacinação. Contudo, devido às características de replicação do vírus, novas variantes sem proteção cruzada entre si estão constantemente a surgir, tornando a vacinação não efetiva. Atualmente, a deteção do coronavírus aviário pode ser feita através de isolamento viral e métodos serológicos. Contudo, a primeira técnica é trabalhosa e demorada, e, a segunda caracteriza-se por ter baixa especificidade e sensibilidade. Assim, os métodos de deteção molecular são uma alternativa, designadamente, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real, que apresenta importantes vantagens tais como, tempo de deteção reduzido, elevada sensibilidade e especificidade e menor risco de contaminação cruzada. Adicionalmente é passível de ser usada no rastreio do vírus nas explorações, e assim, na vigilância nas explorações reduzindo trabalho, tempo e custos. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um método para deteção do vírus da bronquite infecciosa (IBV) por PCR em tempo real. O método é baseado numa reação de transcriptase reversa seguida de PCR em tempo real para determinação qualitativa, isto é, ausência ou presença do coronavírus aviário, usando como alvo uma região altamente conservada do genoma do IBV, 5′-UTR, e, incluindo também, um controlo interno de PCR. Os resultados demonstraram que o ensaio foi específico para o IBV, não tendo sido detetado nenhum dos restantes agentes patogénicos testados. Para além disso, também demonstrou adequada sensibilidade, eficiência de amplificação e intra e inter- variabilidade. Embora este método não permita diferenciar os diferentes tipos de IBV, é útil no rastreio rápido, facilitando assim, o diagnóstico diferencial relativamente a outros agentes patogénicos respiratórios.