Neng, Nuno da RosaQuintas, AlexandreCorreia, BeatrizPereira, Maria Beatriz Jeremias2025-01-062024-12-13http://hdl.handle.net/10400.26/53480Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas MonizAtualmente, a canábis é a substância de abuso mais consumida a nível mundial. No início do século XXI, surgiram no mercado recreativo os canabinoides sintéticos e semissintéticos como alternativas legais à canábis e que representam um perigo emergente à saúde dos consumidores por serem mais potentes e imprevisíveis do que os fitocanabinoides. O presente trabalho visou o desenvolvimento, otimização, validação e aplicação de uma metodologia verde para a análise de canabinoides naturais e semissintéticos (canabidiol (CBD), Δ8-tetrahidrocanabinol (Δ8-THC), Δ9- tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) e hexahidrocanabinol (HHC)) em saliva, por microextração adsortiva em barra (BAμE) seguida de análise por cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa (GC-MS). Pela dificuldade em obter, à data de início do trabalho, padrões analíticos certificados dos diastereoisómeros de HHC, purificou-se este composto a partir de uma amostra de canábis herbal por cromatografia líquida de alta eficiência (LC), tendo os produtos obtidos sido estruturalmente confirmados por GC-MS, LC-MS e espetroscopia de ressonância magnética nuclear. A pureza obtida por GC-MS foi de 72 % para 9R-HHC e 91 % para 9S-HHC. Vários parâmetros que afetam a eficiência da BAμE foram otimizados, tendo-se obtido recuperações médias entre 57,3 (9R-HHC) e 80,6 % (CBD). A validação do método BAμE/GC-MS, em condições experimentais otimizadas, permitiu estimar baixos limites de deteção (1,25 ng/mL) e de quantificação (4,13 ng/mL). Obteve-se boa linearidade na gama compreendida entre 5 e 300 ng/mL (r2 ≥ 0,9963), sendo que todos os valores relativos à precisão e justeza se encontraram dentro dos parâmetros referidos na guia diretiva da UNODC (< 20 %) na qual este trabalho foi baseado. A metodologia otimizada e validada foi aplicada a três amostras reais de saliva fornecidas por voluntários após o consumo, tendo a presença de todos os canabinoides em estudo sido confirmada com concentrações entre 4,4 ng/mL (Δ8-THC) e 672,9 ng/mL (Δ9-THC), encontrando-se na mesma ordem de magnitudes descritas na literatura. A metodologia desenvolvida revelou-se uma alternativa analítica simples, ecológica, de baixo custo e miniaturizada, com potencial para ser utilizada como método de rotina no laboratório.Cannabis is currently the most widely consumed substance of abuse worldwide. At the beginning of the 21st century, synthetic and semi-synthetic cannabinoids emerged on the recreational market as legal alternatives to cannabis and representing an emerging danger to consumers' health due to their higher potency and unpredictability than phytocannabinoids. This work aimed to develop, optimize, validate and apply a green methodology for the analysis of natural and semi-synthetic cannabinoids (cannabidiol (CBD), Δ8 tetrahydrocannabinol (Δ8-THC), Δ9-tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) and hexahydrocannabinol (HHC)) in saliva, by bar adsorptive microextraction (BAμE) followed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) analysis. Due to the difficulty in obtaining certified analytical standards for HHC diastereoisomers at the time the work began, this compound was purified from an herbal cannabis sample by high-performance liquid chromatography (LC), and the products obtained were structurally confirmed by GC-MS, LC-MS and nuclear magnetic resonance spectroscopy. The purity obtained by GC-MS was 72 % for 9R-HHC and 91 % for 9S-HHC. Several parameters affecting the efficiency of BAμE were optimized, obtaining average recoveries between 57,3 (9R-HHC) and 80,6 % (CBD). Validation of the BAμE/GC-MS method, under optimized experimental conditions, allowed the estimation of low limits of detection (1,25 ng/mL) and quantification (4,13 ng/mL). Good linearity was obtained in the range between 5 and 300 ng/mL (r2 ≥ 0.9963), and all the precision and trueness values were within the parameters stated in the UNODC guideline (< 20 %) on which this work was based. The optimized and validated methodology was applied to three real saliva samples provided by volunteers after consumption and the presence of all the cannabinoids under study was confirmed with concentrations between 4,4 ng/mL (Δ8- THC) and 672,9 ng/mL (Δ9-THC), which are in the same order of magnitude as those described in the literature. The methodology developed proved to be a simple, environmentally friendly, low-cost and miniaturized analytical alternative, with the potential to be used as a routine method in the laboratory.porFitocanabinoideBAμEGC-MSAmostras biológicasmaster thesis203759559